發(fā)布時間：2020-12-10 22:58

　　目的:觀察Wnt/β-catenin通路的抑制因子DKK1（Dickkopf-1）在牙囊細胞中的表達,探究在牙囊細胞成骨分化誘導和成熟成骨細胞的形成中DKK1的特異性表達機制,探討其與牙齒萌出和頜骨生長發(fā)育的相關(guān)性。方法:采用酶消化法分離培養(yǎng)牙囊細胞并純化細胞。將純化牙囊細胞分為兩組,對照組:普通α-MEM培養(yǎng)基培養(yǎng),實驗組:α-MEM+成骨誘導液培養(yǎng)。分別培養(yǎng)5d后,ALP染色鑒定成骨細胞的骨形成情況,采用免疫細胞化學法分組觀察DKK1的表達分布;分別培養(yǎng)10d、20d后采用Western Blot分組檢測DKK1、β-catenin、Runx2的蛋白表達水平。結(jié)果:鏡下顯示實驗組細胞ALP染色呈陽性,免疫組織化學顯示DKK1在實驗組表達較對照組減弱;Western Blot檢測結(jié)果示實驗組Wnt通路的關(guān)鍵因子DKK1條帶蛋白表達下調(diào),β-catenin蛋白及成骨相關(guān)蛋白Runx2的表達上調(diào),培養(yǎng)時間越長實驗組與對照組區(qū)別隨之變化明顯。結(jié)論:Wnt通路抑制劑DKK1在牙囊細胞中有表達且受成骨分化影響,體現(xiàn)Wnt/β-catenin通路中DKK1的抑制作用,研究結(jié)果將為牙齒萌出和頜骨生... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

純化牙囊細胞形態(tài)為梭形或三角形×50

圖 2 堿性磷酸酶染色Fig.2Alkaline phosphatase staining 免疫細胞化學法觀察 DKK1 表達成骨誘導組干預 5d 后，根據(jù)有無表達和染色深淺程度判定 DKK1 在牙囊細胞表達，分為陰性、弱陽性、陽性，陰性表達為無特殊顏色染色，弱陽性表現(xiàn)為淺

分為陰性、弱陽性、陽性，陰性表達為無特殊顏色染色，弱陽性表現(xiàn)為淺色或淺棕色，陽性染色表現(xiàn)為深黃或棕褐色為。觀察對照組 DKK1 在牙囊細胞中表達呈棕褐色(圖 3a)，實驗組的表達呈淺棕色(圖 3b),陰性空白組未見黃色或棕褐特殊染色顆粒(圖 3c)。成骨干預后 DKK1 在牙囊細胞中表達隨時間增加而減少，明骨抑制因子 DKK1 與成骨細胞呈負相關(guān)。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2909427