1、成牙骨質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)目的:建立成牙骨質(zhì)細(xì)胞系,觀察細(xì)胞生長,測試細(xì)胞體外礦化能力,檢測細(xì)胞內(nèi)ETBR的存在。方法:培養(yǎng)小鼠源性成牙骨質(zhì)細(xì)胞系OCCM-30,觀察其生長狀態(tài),繪制生長曲線,茜素紅染色檢測其體外礦化能力,免疫熒光染色檢測細(xì)胞內(nèi)ETBR的表達(dá)及定位。結(jié)果:生長曲線結(jié)果示細(xì)胞生長迅速,茜素紅染色結(jié)果示OCCM-30體外誘導(dǎo)可生成礦化結(jié)節(jié),免疫熒光結(jié)果顯示成牙骨質(zhì)細(xì)胞膜上存在ETBR。結(jié)論:OCCM-30細(xì)胞具有體外礦化潛能,細(xì)胞內(nèi)存在ETBR。2、內(nèi)皮素B受體激動(dòng)劑對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡和ALP的影響目的:探討ETBR激動(dòng)劑對(duì)OCCM-30細(xì)胞增殖,凋亡和ALP的影響。方法:采用濃度為10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L的ETBR激動(dòng)劑作為實(shí)驗(yàn)組,0 mol/L ETBR激動(dòng)劑為對(duì)照組,MTT法檢測成牙骨質(zhì)細(xì)胞增殖變化;流式細(xì)胞儀檢測凋亡的轉(zhuǎn)變;堿性磷酸酶染色法檢測成牙骨質(zhì)細(xì)胞活性的轉(zhuǎn)變。結(jié)果:MTT和堿性磷酸酶染色顯示,ETBR激動(dòng)劑抑制細(xì)胞增殖和細(xì)胞活性,并在一定范圍內(nèi)表現(xiàn)出劑量依賴性;流式結(jié)果分析顯示ETBR激動(dòng)劑促進(jìn)細(xì)胞早期凋亡,對(duì)晚期凋亡無明顯影響。結(jié)論:ETBR激動(dòng)劑以濃度依賴方式抑制成牙骨質(zhì)細(xì)胞增殖和ALP表達(dá),并促進(jìn)細(xì)胞早期凋亡。3、內(nèi)皮素B受體激動(dòng)劑對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化的影響目的:檢測10-9mol/L的ETBR激動(dòng)劑對(duì)OCCM-30細(xì)胞體外礦化、分化的影響。方法:茜素紅染色檢測細(xì)胞體外礦化;real-time PCR法檢測分化相關(guān)基因Runx2、Bsp、Osterix、Ocn和Coll mRNA相對(duì)表達(dá)情況;Western blot法檢測Runx2和Osterix表達(dá)情況。結(jié)果:茜素紅染色示,ETBR激動(dòng)劑抑制細(xì)胞體外礦化;real-time PCR結(jié)果示,Runx2、Bsp、Osterix、Ocn和CollmRNA的表達(dá)水平均有不同程度的下調(diào);Western blot示Runx2和Osterix表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:10-9mol/L的ETBR激動(dòng)劑可通過下調(diào)分化相關(guān)基因Runx2、Bsp、Osterix、Ocn、Coll mRNA表達(dá)和減少分化相關(guān)蛋白R(shí)unx2、Osterix的相對(duì)表達(dá)水平,抑制OCCM-30細(xì)胞體外礦化和分化。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

圖２．１成牙骨質(zhì)細(xì)胞形態(tài)（ｘｉ〇）??Ｆｉｇ２．１?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｃｅｍｅｎｔｏｂｌａｓｔｓ?（ｘ?１〇）??

?２．３．３免疫熒光染色??如圖２．３所示，經(jīng)免疫熒光染色，成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可見內(nèi)皮素Ｂ??受體的陽性，主要分布在細(xì)胞膜和胞漿。??ｍ??圖２．３?ＥＴＢＲ免疫熒光染色（ｘｌ〇）??Ｆｉｇ．２．３?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｆｏｒ?ＥＴＢＲ?（ｘ?１０）??２．３．４成牙骨質(zhì)細(xì)胞的礦化誘導(dǎo)??細(xì)胞礦化誘導(dǎo)過程，細(xì)胞融合８０％以上，開始復(fù)層生長，細(xì)胞增??殖速度降低，開始進(jìn)行分化，誘導(dǎo)７ｄ時(shí)，即可在顯微鏡下觀察到礦??化結(jié)節(jié)，隨誘導(dǎo)時(shí)間延長，礦化結(jié)節(jié)數(shù)目增加，體積增大，ｌ〇ｄ時(shí)礦??化結(jié)節(jié)明顯。圖２．４為誘導(dǎo)１２ｄ，對(duì)照組鏡下可見零星散布的紅染小??結(jié)節(jié)，誘導(dǎo)組鏡下可見遍及皿底的紅染礦化結(jié)節(jié)。??？?？?．．?．??

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本文編號(hào)：2889796