正畸牙移動是在機(jī)械力作用下，牙周組織在一定時(shí)期內(nèi)產(chǎn)生一種在生理限度內(nèi)的組織改變，從而使牙齒朝著預(yù)定的方向進(jìn)行移動。牙周膜細(xì)胞位于牙槽骨和牙齒之間，是機(jī)械力的直接效應(yīng)細(xì)胞；因此，機(jī)械力無疑是啟動牙周膜細(xì)胞生理反應(yīng)，導(dǎo)致正畸牙齒移動的前提和關(guān)鍵。已有研究表明，體內(nèi)、外牙周膜細(xì)胞都可以表達(dá)破骨細(xì)胞分化因子(Osteoclast Differentiation Factor, ODF)和破骨細(xì)胞發(fā)生抑制因子(Osteoclasto-genesis Inhibitory Factor, OCIF)，而ODF、OCIF是骨微環(huán)境內(nèi)調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞征集和功能的關(guān)鍵因子；在破骨細(xì)胞發(fā)育成熟的過程中，在各種骨吸收刺激因子作用下，ODF表達(dá)升高，通過與破骨細(xì)胞前體細(xì)胞膜上NF-_κβ受體激活物(RANK)的直接結(jié)合將信號傳入，引起級聯(lián)反應(yīng)，從而使破骨細(xì)胞分化成熟和激活；OCIF可競爭性與ODF結(jié)合，封閉ODF與RANK的結(jié)合，從而抑制破骨細(xì)胞的分化與成熟。破骨細(xì)胞的骨吸收作用是牙齒移動的第一步，通過牙槽骨的交替吸收和增生使牙齒發(fā)生定向移動，從而實(shí)現(xiàn)正畸矯治的目的。但有關(guān)機(jī)械力作用下牙周組織改建的分子生物學(xué)機(jī)制至今人們還尚未完全清楚，牙周組織是如何將機(jī)械信號轉(zhuǎn)化為生物信號，以及某些骨吸收刺激因子在此過程中作用究竟如何還需要進(jìn)一步探討闡明。 第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 體外細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞力學(xué)實(shí)驗(yàn)研究是目前國內(nèi)外正在興起 的研究熱點(diǎn)，其方法和技術(shù)正在不斷的完善和發(fā)展。本研究通過 動物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞培養(yǎng)，結(jié)合細(xì)胞力學(xué)實(shí)驗(yàn)方法和分子生物學(xué) 檢測技術(shù)，首次觀察了機(jī)械應(yīng)力及骨吸收刺激因子1，25一(0H) ZD。對組織和體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞及大鼠骨髓破骨細(xì)胞中 ODF、OC工F表達(dá)變化情況，進(jìn)一步探討牙周組織改建的分子機(jī)制， 并為臨床應(yīng)用某些外源性刺激因子來干預(yù)正畸牙周組織改建的 速度提供一條新的思路。研究內(nèi)容如下: 一牽張力作用下牙周組織ODF及OCIF表達(dá)變化的研究 目的:運(yùn)用原位雜交的方法，觀察ODF及OCIF在正畸大鼠 牙周組織改建過程中張力側(cè)的表達(dá)變化，探討ODF及OCIF與正 畸牙周組織改建的關(guān)系。方法:8周齡成年健康雄性SD大鼠30 只，隨機(jī)分為對照組、牙齒移動1天組、3天組、5天組、7天組， 共5組，每組6只。在大鼠上領(lǐng)右側(cè)第一磨牙與上領(lǐng)切牙之間安 置正畸矯治器裝置，施力5飩。在相應(yīng)時(shí)間段處死實(shí)驗(yàn)動物，取 材固定，進(jìn)行原位雜交染色、圖像分析。結(jié)果:在牙齒移動3天 后，OC工F原位雜交染色在張力側(cè)逐漸深染，OC工F mRNA陽性細(xì)胞 數(shù)量逐漸增多，OCIF陽性表達(dá)在5天時(shí)達(dá)到最高，并可見到有新 骨形成;7天時(shí)OC工F陽性表達(dá)及分布情況與3天時(shí)相類似。張力 側(cè)牙周膜細(xì)胞、成骨細(xì)胞的ODF原位雜交染色陽性反應(yīng)隨天數(shù)的 增加有逐漸增強(qiáng)趨勢，并可觀察到有ODF mRNA陽性破骨細(xì)胞出 現(xiàn)，但表達(dá)變化并不明顯。結(jié)論:ODF及OCIF參與了正畸牙周組 織改建過程，OCIF mRNA在張力區(qū)隨正畸牙齒移動表達(dá)升高具有 時(shí)間依賴性。 二.機(jī)械力作用下人牙周膜細(xì)胞ODF及OCIF的表達(dá)及意.義 目的:觀察周期性機(jī)械牽張力對人牙周膜細(xì)胞(HPDLC) ODF mRNA及OCIF mRNA表達(dá)的影響，探討正畸牙周組織改建的分 子機(jī)制。方法:通過體外細(xì)胞培養(yǎng)加載系統(tǒng)施于人牙周膜細(xì)胞以 第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 頻率為6周/分，彈性基底膜發(fā)生12%形變率的周期性牽張力， 利用原位雜交染色及Rl’- PCR檢測技術(shù)，觀察人牙周膜細(xì)胞ODF 及OCIF mRNA表達(dá)強(qiáng)度的變化。結(jié)果:體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì) 胞在正常情況下表達(dá)ODF mRNA及OCIF mRNA。當(dāng)間歇性牽張 力作用6小時(shí)、12小時(shí)及24小時(shí)后，隨著作用時(shí)間的延長，人 牙周膜細(xì)胞ODF mRNA的表達(dá)有減弱趨勢;而OCIF mRNA的 表達(dá)有增強(qiáng)趨勢。結(jié)論:機(jī)械牽張力可以調(diào)節(jié)人牙周膜細(xì)胞ODF、 OCIF mRNA的表達(dá)，從而可以調(diào)節(jié)骨吸收作用。ODF mRNA表 達(dá)的減弱及OCIF mRNA表達(dá)的增強(qiáng)提示在機(jī)械牽張力的作用 下，成骨作用有增強(qiáng)趨勢。 三.1{25一(OH)2D3作用下人牙周膜細(xì)胞ODF及OCIF的表達(dá) 及意義 目的:觀察1，25一(OH) ZD。對體外人牙周膜細(xì)胞(HPDLC)ODF mRNA及OCIF mRNA表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討正畸牙周組織改 建的分子機(jī)制。方法:以不同濃度的1，25一(oH)2D3(o、10一’‘，、 10一8、10一6mol/L)作用于體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞，利用原位雜交 染色及Rl’- PCR檢測技術(shù)，檢測不同濃度的1，25一(OH)2D3對體 外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞ODF、OCIF mRNA表達(dá)的強(qiáng)度變化。結(jié)果: 隨1，25一(OH)2D3濃度的升高，人牙周膜細(xì)胞ODF mRNA的表達(dá)顯 著升高，而OCIF mRNA的表達(dá)降低。結(jié)論:1，25一(OH)2D3在體 外可影響人牙周膜細(xì)胞ODF mRNA和OC工F mRNA的表達(dá);從而通 過調(diào)節(jié)ODF和OC工F相對含量的變化，影響牙周組織改建過程。 四.應(yīng)用1，25一(OH) 2D3體外誘導(dǎo)大鼠骨髓破骨細(xì)胞形成的實(shí) 驗(yàn)觀察 目的:觀察1，25一(OH)2D3體外誘導(dǎo)大鼠骨髓細(xì)胞形成破骨 細(xì)胞的作用。方法:4周齡SD大鼠長骨骨髓細(xì)胞懸液接種于預(yù)置 蓋玻片或牙本質(zhì)片的24孔培養(yǎng)板內(nèi)，試驗(yàn)組加入誘導(dǎo)劑1，25- (0H)2D3而對照組不加，每三天換液一次，培養(yǎng)兩周。結(jié)果:培 第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 養(yǎng)一周左右光鏡下可見有多核破骨細(xì)胞形成，胞
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R783.5
【部分圖文】：

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文圖1一2對照組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一33天組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一45天組大鼠牙周組織中圖1一57天組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一6對照組大鼠牙周組織中ODF表達(dá)情況(x200)

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文圖1一2對照組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一33天組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一45天組大鼠牙周組織中圖1一57天組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一6對照組大鼠牙周組織中ODF表達(dá)情況(x200)

圖1一2對照組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一33天組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一45天組大鼠牙周組織中圖1一57天組大鼠牙周組織中OCIF表達(dá)情況(x200)OCIF表達(dá)情況(x200)圖1一6對照組大鼠牙周組織中ODF表達(dá)情況(x200)
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本文編號：2879470