NF-κB依賴性炎癥介質(zhì)在口腔扁平苔蘚中的表達及相關(guān)信息通路的研究

發(fā)布時間：2020-11-11 13:06

　　研究背景：口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)是一種慢性炎癥性口腔粘膜病，其組織學特征是上皮基底細胞的液化變性和固有層大量的T淋巴細胞呈帶狀浸潤。目前大多數(shù)研究認為該病與免疫反應(yīng)的異常有關(guān)。各種炎癥介質(zhì)，包括細胞因子、生長因子、粘附因子、蛋白酶類等在介導(dǎo)這一異常的免疫反應(yīng)中起著主要作用。近年研究發(fā)現(xiàn)，口腔扁平苔蘚患者血清中TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6等多種細胞因子分泌水平增高，高度提示細胞因子紊亂在口腔扁平苔蘚的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。然而迄今為止，口腔扁平苔蘚患者炎癥介質(zhì)調(diào)控和釋放的確切機制尚不明確。目前，核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)對炎癥介質(zhì)的調(diào)控作用成為近年來廣受關(guān)注的研究課題。NF-κB是一類能與多種基因啟動子發(fā)生特異性結(jié)合并增強其轉(zhuǎn)錄的一種蛋白質(zhì)因子�；罨腘F-κB與靶基因結(jié)合后即可調(diào)節(jié)其基因轉(zhuǎn)錄并促進其表達。因此，從NF-κB角度研究口腔扁平苔蘚的發(fā)病機理進而尋找病情監(jiān)控、療效檢測的敏感指標，探索口腔扁平苔蘚治療新策略是研究的新方向，具有深遠的理論意義和臨床實用價值。研究目的： 1．探討口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中NF-κB依賴性炎性介質(zhì)TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的表達情況及其臨床意義，并從中篩選出有利于指導(dǎo)臨床的敏感性指標。 2．檢測NF-κB、MMP-9蛋白在口腔扁平苔蘚病損部位組織中表達情況，揭示其在口腔扁平苔蘚發(fā)病機制中的作用、二者表達的相互關(guān)系及其與臨床病理特征之間的關(guān)系。 3．探討NF-κB信息通路在口腔扁平苔蘚患者外周血單個核細胞(peripheral blood monouclear cells，PBMC)中對MMP-9表達的調(diào)控機制。研究方法： 1．口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的檢測。30例資料完整的口腔扁平苔蘚患者(糜爛型16例，網(wǎng)紋型14例)和30例健康志愿者納入研究，同時配對收集其血清和唾液樣本。采用ELISA法對樣本中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的含量進行測定，分析四個指標在血清和唾液中表達的相關(guān)性。 2．采用免疫組織化學方法檢測22例口腔扁平苔蘚患者(糜爛型和網(wǎng)紋型各11例)及10例正�？谇徽衬ぶ蠳F-κB p65、MMP-9蛋白的表達情況，分析NF-κB p65、MMP-9蛋白表達的相關(guān)性。 3．分離口腔扁平苔蘚患者PBMC體外培養(yǎng)，采用免疫細胞化學方法、ELISA法觀察經(jīng)10ng／mlTNF-α刺激24h后，PBMC中NF-κB的活化狀況，以及PBMC表達MMP-9的量的變化；運用NF-κB的特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)預(yù)處理抑制NF-κB的活化，觀察TNF-α對體外培養(yǎng)的口腔扁平苔蘚患者PBMC中MMP-9蛋白表達量影響的改變。研究結(jié)果： 1．口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8、MMP-9的檢測結(jié)果：①與健康對照組相比，口腔扁平苔蘚患者血清和唾液中TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9均有不同程度的增高。進一步對口腔扁平苔蘚的兩種亞型進行分析，發(fā)現(xiàn)血清中上述四個指標在糜爛型與網(wǎng)紋型中的表達未見明顯差別；糜爛型口腔扁平苔蘚唾液中IL-8和MMP-9的含量較網(wǎng)紋型口腔扁平苔蘚明顯增高；②口腔扁平苔蘚患者唾液TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9的表達較血清明顯增高，TNF-α、IL-6、IL-8和MMP-9在兩種檢測媒介中的表達均呈正相關(guān)關(guān)系。 2．NF-κB p65蛋白在口腔扁平苔蘚中陽性率為77.3％，而在正常口腔粘膜組僅有1例呈弱陽性表達。其在網(wǎng)紋型口腔扁平苔蘚中陽性率為54.5％，糜爛型口腔扁平苔蘚陽性率為100％，兩組之間比較差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.04＜0.05)。MMP-9蛋白在口腔扁平苔蘚中陽性率為63.63％，而在正常口腔粘膜組僅有1例呈弱陽性表達。其在網(wǎng)紋型口腔扁平苔蘚中陽性率為36.4％，糜爛型OLP中陽性率為90.9％，兩組之間比較差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.03＜0.05)�？谇槐馄教μ\中NF-κB p65與MMP-9蛋白表達存在較高吻合度(κ=0.68，P=0.00＜0.05)。 3．PDTC可阻斷口腔扁平苔蘚患者PBMC源性MMP-9的誘導(dǎo)生成。應(yīng)用TNF-α(10ng／ml)作用24h后，OLP組PBMC NF-κB p65細胞染色陽性率、培養(yǎng)上清液MMP-9蛋白含量明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義。而培養(yǎng)體系預(yù)先應(yīng)用PDTC(100μmol／L)處理，再用TNF-α(10ng／ml)刺激，OLP組PBMC NF-κB細胞染色陽性率和培養(yǎng)上清中MMP-9的分泌量較未加入PDTC組明顯下降。結(jié)論： 1．唾液作為檢測媒介在口腔扁平苔蘚的臨床診治中具有潛在的應(yīng)用價值。 2．唾液IL-8和MMP-9含量的測定可能成為口腔扁平苔蘚病情監(jiān)控的敏感指標。 3．MMP-9在口腔扁平苔蘚病損中的高表達可能是由于各種誘因激活NF-κB的活化而引發(fā)的。NF-κB信息通路的活化可能在口腔扁平苔蘚的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，同時提示阻斷NF-κB信息通路的激活可能成為治療口腔扁平苔蘚藥物新的研發(fā)靶點。
【學位單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2007
【中圖分類】：R781.5
【部分圖文】：

網(wǎng)紋型,糜爛型,水平比較,唾液