目的： （1）通過(guò)組織塊法體外培養(yǎng)人頰黏膜成纖維細(xì)胞（HBMPs）建立細(xì)胞模型，為后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。（2）①觀察不同濃度甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞增殖的影響。②通過(guò)脂多糖（LPS）刺激建立人頰黏膜成纖維細(xì)胞的細(xì)胞炎癥模型，同時(shí)加入甘草甜素進(jìn)行干預(yù)，觀察白細(xì)胞介素-6（IL-6）的濃度，來(lái)探討甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用。 方法： （1）取OLP患者的正常頰黏膜，組織塊法培養(yǎng)人頰黏膜成纖維細(xì)胞，經(jīng)過(guò)傳代、分離、純化，取第四代細(xì)胞進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，證明所得細(xì)胞為HBMFs。（2）①取生長(zhǎng)良好的頰黏膜成纖維細(xì)胞，加入0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml的甘草甜素,培養(yǎng)24h、48h、72h后,經(jīng)MTT法檢測(cè)每孔的光密度值(OD)。②第4代成纖維細(xì)胞為對(duì)照組、加入脂多糖為炎癥組、同時(shí)加入脂多糖和甘草甜素為實(shí)驗(yàn)組，用ELISA法分別檢測(cè)三組IL-6的濃度。 結(jié)果： （1）通過(guò)組織塊法培養(yǎng)的人頰黏膜成纖維細(xì)胞，經(jīng)傳代、分離、純化至第四代，得到純度高、活性好的HBMPs。倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或者星形，細(xì)胞核清晰，圓形或橢圓形居中，胞漿豐富。細(xì)胞密度高時(shí)交織排列成“網(wǎng)狀”或者“束狀”。免疫組織化學(xué)法顯示細(xì)胞抗角蛋白染色陰性，抗波形蛋白染色陽(yáng)性。（2）①M(fèi)TT法結(jié)果：與0μg/ml對(duì)照組比較，除了25μg/ml組在24h時(shí)間段內(nèi)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組在各時(shí)段差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，在一定范圍內(nèi)隨藥物濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)，具有明顯的時(shí)間和劑量依賴性。②ELISA法結(jié)果：對(duì)照組有微量的IL-6產(chǎn)生，炎癥組分泌IL-6明顯高于對(duì)照組,差異有顯著性(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組IL-6分泌量明顯低于炎癥組,差異有顯著性(P0.05)。結(jié)論： （1）人頰部固有層的主要細(xì)胞為成纖維細(xì)胞，組織塊法培養(yǎng)頰黏膜成纖維細(xì)胞為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞模型。（2）①甘草甜素對(duì)人頰黏膜成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用。②人頰黏膜成纖維細(xì)胞經(jīng)過(guò)脂多糖促炎，炎癥因子IL-6釋放增多，體外模擬口腔扁平苔蘚（OLP）的炎癥狀態(tài)。加入甘草甜素進(jìn)行干預(yù)，IL-6的釋放顯著降低，說(shuō)明甘草甜素在治療口腔扁平苔蘚的炎癥反應(yīng)中有重要作用，為臨床治療口腔扁平苔蘚提供理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R781.5
【文章目錄】：
中英文縮略詞簡(jiǎn)表
摘要
Abstract
前言
第一部分
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    四、討論
第二部分
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    四、 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2862276