目的 在牙齒發(fā)育期間,牙乳頭間充質細胞分化為成牙本質細胞,形成原發(fā)性牙本質；在牙齒萌出后,無論年輕恒牙,還是成熟恒牙,牙髓在受創(chuàng)傷和感染時,牙髓組織中的成牙本質細胞和新分化的成牙本質細胞樣細胞就會形成第三期牙本質,表明牙髓組織具有較強的自我防御能力和自身修復潛能。關于成牙本質細胞和成牙本質細胞樣細胞的分化以及牙本質形成的確切機制還不完全清楚,但目前認為一些生物分子如轉錄因子、信號分子、生長因子、細胞外基質分子等參與調(diào)節(jié)牙髓組織中的細胞增殖、分化和基質合成。 LIM礦化蛋白1 (LIM mineralization protein-1, LMP-1)是LIM結構域蛋白家族成員,是一種胞內(nèi)非分泌蛋白,它廣泛存在于各種組織中。LMP-1調(diào)控成骨細胞的分化和成熟以及骨的形成。近年來有文獻報道LMP-1在人健康成熟牙髓牙本質復合體中的前期牙本質、成牙本質細胞、未礦化的修復性牙本質、成牙本質細胞樣細胞、血管內(nèi)皮細胞和牙髓成纖維細胞中均有表達；提示LMP-1在牙髓細胞和成牙本質細胞的分化,牙本質基質的礦化中起著重要作用。但目前有關LMP-1在年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織中表達差異的研究未見報道。而對這一問題的深入研究和探討,將有助于我們進一步認識牙髓牙本質復合體的發(fā)育、成熟以及年輕恒牙牙髓修復能力的生物學機制,并為臨床研究活髓保存治療技術提供新的思路。 本實驗應用RT-PCR和Western-blot技術,首次檢測并比較LMP-1在人年輕恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳頭組織中的表達,以探尋其在牙髓牙本質復合體發(fā)育和成熟中的作用,為臨床探尋新的活髓保存治療方法提供理論依據(jù)和實驗基礎。 材料和方法 收集48例因正畸或阻生拔除的健康無齲的牙齒,研究對象年齡為11-30歲,均無全身系統(tǒng)性疾病,近三個月未曾服用免疫制劑和抗菌藥物。牙齒拔除后立即將年輕恒牙的牙乳頭用鑷子分離,凍存；然后將牙齒縱向劈開,完整取出牙髓組織,凍存。成熟恒牙直接將牙齒縱向劈開,完整取出牙髓組織,凍存。 按恒牙牙根發(fā)育的八個階段,結合臨床和X光片檢查,將R2／3,R3／4的年輕恒牙的牙乳頭組織歸為第1組,共24例；將R2／3,R3／4的年輕恒牙的牙髓組織歸為第2組(根尖孔未閉合組,根尖孔呈喇叭口狀),共24例；將Ac的成熟恒牙的牙髓組織歸為第3組(根尖孔閉合組),共24例；(R2／3代表牙根形成2／3；R3／4代表牙根形成3／4；Ac代表根尖已封閉)。每組中有12例樣本用于RT-PCR檢測,另12例樣本用于Western-blot檢測。 采用RT-PCR和Western-blot技術對LMP-1進行基因水平和蛋白水平的檢測,采用SPSS 11.0軟件包,應用單因素方差分析方法對圖像分析的結果(即灰度值)進行統(tǒng)計學分析,檢驗水準α=0.05,P0.05有統(tǒng)計學意義。 結果 無論是在mRNA水平還是在蛋白質水平,LMP-1在年輕恒牙的牙乳頭組織、年輕恒牙的牙髓組織和成熟恒牙的牙髓組織中均有表達,但表達強度不同。LMP-1在年輕恒牙牙髓組織中的表達較其在年輕恒牙牙乳頭組織以及成熟恒牙牙髓組織中的表達明顯上調(diào),具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。 結論 1、本實驗用RT-PCR和Western-blot技術首次檢測出LMP-1在年輕恒牙的牙乳頭組織,年輕恒牙的牙髓組織及成熟恒牙的牙髓組織中有表達。 2、年輕恒牙牙髓組織中LMP-1的表達高于其在年輕恒牙牙乳頭組織中的表達,并且高于成熟恒牙牙髓組織中的表達。
【學位單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R788
【部分圖文】：

第2組中的表達明顯高于其它兩組，具有統(tǒng)計學差異，尸<0.05;而LMP一1在第l組與第3組中的表達相比，不具有統(tǒng)計學差異，尸>0.05。(圖l，圖2，表l)500坤100坤500bP100坤.口口口口口......介actin圖1，各組組織中LMP一1與p一 actinmRNA的Rl’ -pCR產(chǎn)物電泳結果注:1一4為第1組，年輕恒牙的牙乳頭組織;5一8為第2組，年輕恒牙的牙髓組織;9一12為第3組，成熟恒牙的牙髓組織; M:MarkerLMP小Z14bPp一aetin:439bP表1，Rl’ -PCR檢測各組組織中LMP一lmRNA表達的圖像分析結果組別例數(shù)(n)灰度值的比值(見士‘)1212 0.2483士0.0921 0.4617士0.2379’ 0.3050士0.0946△注:’與第l組相t匕，‘與第3組相比

尸<0.05)。其中LMP一1在第2組中的表達明顯高于其它兩組，具有統(tǒng)計學差異，尸<0.05;而LMP一1在第1組與第3組中的表達相比，不具有統(tǒng)計學差異，P>0.05。(圖3，圖4，表2) 123456789U護wel60KDp一c血42KD圖3，LMP一1與p一actin在各組組織中的蛋白表達注:1一3為第一組，年輕恒牙的牙乳頭組織;4一6為第二組，年輕恒牙的牙髓組織;7一9為第三組，成熟恒牙的牙髓組織。

尸<0.05)。其中LMP一1在第2組中的表達明顯高于其它兩組，具有統(tǒng)計學差異，尸<0.05;而LMP一1在第1組與第3組中的表達相比，不具有統(tǒng)計學差異，P>0.05。(圖3，圖4，表2) 123456789U護wel60KDp一c血42KD圖3，LMP一1與p一actin在各組組織中的蛋白表達注:1一3為第一組，年輕恒牙的牙乳頭組織;4一6為第二組，年輕恒牙的牙髓組織;7一9為第三組，成熟恒牙的牙髓組織。
【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 鄧毅,鄧忠良;LIM骨礦化蛋白與脊柱融合[J];國外醫(yī)學(骨科學分冊);2005年06期

2 王忠東;牙髓自身修復潛能的研究進展[J];國外醫(yī)學.口腔醫(yī)學分冊;1996年02期

3 劉素彩,趙志剛,趙長安,張志勇,劉靖,李恩;LMP-1 mRNA反義寡核苷酸抑制大鼠成骨細胞的分化[J];基礎醫(yī)學與臨床;2002年02期

4 王效英;張旗;王強;陳卓;陳智;;胞內(nèi)信號轉導分子LIM礦化蛋白1在人牙髓細胞體外礦化過程中表達的實驗研究[J];口腔醫(yī)學研究;2006年03期

5 王效英;張旗;王強;陳卓;陳智;;胞內(nèi)信號轉導分子LIM礦化蛋白-1在人牙周膜細胞體外礦化過程中表達的實驗研究[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2007年01期

本文編號：2849058