目的： 本實驗通過研究三種排齦線(腎上腺素排齦線、硫酸鋁排齦線、不含藥排齦線)的細胞相容性及排齦線在不同浸提時間(5min、10min、15min、30min)下對體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞(human gingival fibroblasts, HGFs)的毒性大小,為臨床選擇合適的排齦線和排齦時間提供理論依據(jù)。 方法： 實驗1、采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)HGFs,并進行形態(tài)學和免疫學鑒定。對HGFs進行凍存與復蘇,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。 實驗2、三種排齦線(含腎上腺素排齦線、含硫酸鋁排齦線、不含藥排齦線)分別浸透在含10%胎牛血清的DMEM中24h。浸提液再按1：1和1：4濃度稀釋,分別作用于體外培養(yǎng)的HGFs,陰性對照組為含10%胎牛血清的DMEM,噻唑蘭(Thi-azolyl blue, MTT)比色測定細胞增殖活性,透射電鏡觀察細胞超微結構。 實驗3、將上述每種排齦線各4段,分別浸透在含10%胎牛血清的DMEM中,5min、10min、15min、30min后取出排齦線。采用MTT比色法觀察不同時間的浸提液對HGFs的活性影響；Annexin/PI雙染法檢測不同時間的浸提液對HGFs凋亡的影響。 結果： 1、HGFs原代培養(yǎng)成功率為86.7%,細胞呈梭形或紡錘形。免疫組織化學(Immunohistochemistry, IHC)鑒定抗波形蛋白抗體染色陽性,抗角蛋白抗體染色陰性,為中胚層來源的成纖維細胞。HGFs凍存與復蘇成功,細胞經(jīng)兩次傳代后生物學性狀與原代相似。 2、MTT結果顯示：每組排齦線浸提液經(jīng)1：1稀釋后細胞活性低于正常(p0.05),1：4稀釋后只有腎上腺素排齦線細胞活性較正常組低(p0.05)；三組排齦線浸提液毒性大小依次為：腎上腺素排齦線硫酸鋁排齦線不含藥排齦線(p0.05)。透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope, TEM)觀察,腎上腺素組部分細胞出現(xiàn)凋亡,其他兩組僅觀察到細胞器的損傷。 3、MTT結果顯示：三種排齦線在不同浸提時間下均產(chǎn)生毒性損傷作用,每組排齦線浸提5min與1Omin的細胞毒性作用相同(p0.05)；腎上腺素排齦線浸提5min與15min、30min比較差異有統(tǒng)計學意義,硫酸鋁排齦線浸提5min與30min比較差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)；不含藥排齦線在各個浸提時間段毒性損傷作用相同(p0.05)。流式細胞儀(Flow cytometer, FCM)觀察,不同浸提時間下的排齦線可誘導HGFs凋亡的發(fā)生,隨著浸提時間延長(15min、30min), HGFs的早期凋亡率逐漸增加,顯著高于正常組(p0.05)。 結論： 1、采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代HGFs及凍存與復蘇方法可行,為進一步從細胞學、分子生物學水平研究口腔材料的細胞相容性奠定了基礎。 2、各組排齦線浸提液對HGFs都有一定的毒性,腎上腺素排齦線毒性最大,硫酸鋁排齦線毒性次之,不含藥排齦線也出現(xiàn)了一定的細胞毒性。 3、不同浸提時間下的排齦線對HGFs的活性及凋亡有不同程度的影響,隨著浸提時間的延長,細胞活性逐漸降低,凋亡率增大。 4、使用腎上腺素排齦線排齦時不超過l0min為宜,硫酸鋁排齦線排齦不超過15min。
【學位單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R783.3
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
引言
    參考文獻
第一部分 正常人牙齦成纖維細胞的分離培養(yǎng)、鑒定、凍存及復蘇
    材料和方法
    結果
    討論
    結論
    參考文獻
第二部分 三種排齦線對體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞的毒性比較
    材料和方法
    結果
    討論
    結論
    參考文獻
第三部分 不同浸提時間下的排齦線對牙齦成纖維細胞的毒性研究
    材料和方法
    結果
    討論
    結論
    參考文獻
全文總結
附圖
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝
文獻綜述
    參考文獻

【參考文獻】

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1 張津京;劉玉華;呂培軍;趙一姣;;三維模型分析法評價不同排齦時間下的齦溝寬度[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2011年01期

2 馮云枝;曾曉華;;不同排齦藥物的排齦效果觀察[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2011年01期

3 張曉明;惠敏;劉健;;排齦時間與藥物對牙齦成纖維細胞的毒性比較研究[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2011年02期

4 樊聰,馮海蘭,何建新;應用排齦技術減少臨床牙齦損傷[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志;2001年01期

本文編號：2846851