目的：通過體外培養(yǎng)人牙髓干細(xì)胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs),觀察重組腺病毒介導(dǎo)的表皮生長(zhǎng)因子(recombinant adenovirus mediated epidermal growth factor, rAd-EGF)轉(zhuǎn)染至hDPSCs后對(duì)其生長(zhǎng)、增殖和凋亡的影響,為EGF對(duì)hDPSCs的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),并為牙齒缺損與牙再生提供可能的新思路和新方法。方法：1.常規(guī)收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的hDPSCs,將密度為1×105/ml的細(xì)胞懸液接種至6孔板中,每孔細(xì)胞懸液量為2ml,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃榭瞻捉M(只有hDPSCs和培養(yǎng)基)、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染rAd-EGFP的hDPSCs)和實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染rAd-EGF的hDPSCs),待24h細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染rAd-EGFP與rAd-EGF,在72h后采用RT-PCR檢測(cè)rAd-EGF轉(zhuǎn)染hDPSCs后對(duì)EGF mRNA表達(dá)的影響情況。2.體外培養(yǎng)hDPSCs,常規(guī)收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的hDPSCs,將密度為4×103/ml的細(xì)胞懸液接種于96孔板中,每孔細(xì)胞懸液量為200μl,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃榭瞻捉M、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。待24h細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染rAd-EGFP與rAd-EGF,在1、3、5、7、9、11d的同一時(shí)點(diǎn),采用MTT比色法觀察rAd-EGF轉(zhuǎn)染hDPSCs后對(duì)其體外增值能力的影響。3.常規(guī)收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的hDPSCs,將密度為3×106/ml的細(xì)胞懸液接種于6孔板中,每孔中的細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染rAd-EGFP與rAd-EGF,繼續(xù)培養(yǎng)48h,用流式細(xì)胞儀Annexin V-FITC/PI法檢測(cè)rAd-EGF轉(zhuǎn)染hDPSCs后的凋亡情況。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組hDPSCs中EGFmRNA的表達(dá)水平相對(duì)于陰性對(duì)照組與空白組均明顯上調(diào)(P0.05)。與陰性對(duì)照組與空白組比較,實(shí)驗(yàn)組hDPSCs體外增殖能力明顯升高,第1-7天升高明顯,有顯著性差異(P0.05),但7天后減弱,無顯著性差異(P0.05)。流式細(xì)胞Annexin V-FITC/PI法結(jié)果顯示在作用時(shí)間相同的情況下同陰性對(duì)照組與空白組相比,實(shí)驗(yàn)組hDPSCs體外凋亡指數(shù)明顯降低(P0.05)。結(jié)論：rAd-EGF轉(zhuǎn)染入hDPSCs, EGF mRNA的表達(dá)量增加,在短期內(nèi)對(duì)其增殖能力具有促進(jìn)作用,對(duì)其凋亡具有抑制作用。
【學(xué)位單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R78

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本文編號(hào)：2816041