目的腺樣囊性癌(adenoid cystic careinoma)又稱圓柱瘤(cylindroma),占涎腺腫瘤的5%～10%,在涎腺惡性腫瘤中占24%,其中在頜下腺及舌下腺中是居首位的惡性腫瘤,最多見的年齡是40～60歲。其主要的病理學(xué)特點為嗜神經(jīng)侵犯及易于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,目前對腺樣囊性癌多主張采用手術(shù)聯(lián)合放化療的綜合治療為主,其五年生存率一般在60%左右,其10年、15年、20年生存率分別為30～39%、24～26%、12.5～21%,其療效仍然不能令人滿意。因此,探討新的治療方法具有極其重要的意義。 近年來腫瘤的基因治療發(fā)展迅速,主要的方法有自殺基因、免疫基因、多藥耐藥基因以及抗血管生成基因等。其中自殺基因被認(rèn)為是最有前景的基因治療方法之一。已有的研究證實雙自殺基因治療具有單自殺基因療法無可比擬的優(yōu)越性。王安訓(xùn)等的研究也顯示HSV-TK/GCV系統(tǒng)具有放療增敏作用,可以提高放療對口腔鱗癌的敏感性。本研究旨在構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES-CD及pIRES-TK,并共同轉(zhuǎn)染ACC-2細(xì)胞,并應(yīng)用前體藥物干預(yù),探討其對ACC-2細(xì)胞在有氧與乏氧條件下的放療增敏作用,以尋求更為有效的自殺基因治療方法。 方法重組表達(dá)質(zhì)粒pIRES-CD及pIRES-TK以電穿孔方法共同轉(zhuǎn)染至ACC-2細(xì)胞,然后以400μg/mL新霉素(Geneticin G418)篩選10d后獲得穩(wěn)定表達(dá)CD及TK基因的ACC-2細(xì)胞,提取該細(xì)胞的總RNA,RT-PCR檢測CD、TK基因的表達(dá)。將陽性克隆的ACC-2細(xì)胞分別在有氧及乏氧條件下給予0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy不同劑量X線照射及前體藥物GCV及5-FC干預(yù),通過細(xì)胞克隆形成實驗,以探討雙自殺基因及前體藥物在有氧和乏氧條件下對ACC-2細(xì)胞放療增敏作用的影響。采用SPSS13.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。 結(jié)果RT-PCR檢測到ACC-2/CD-TK中CD、TK基因的表達(dá)。隨X線照射劑量的增大各組細(xì)胞放療后克隆形成率均明顯降低;有氧條件下X線照射ACC-2/CD-TK+前體藥物組細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)均較相同照射劑量X線照射ACC-2及ACC-2/CD-TK細(xì)胞組低(P＜0.05);乏氧條件下X線照射ACC-2/CD-TK+前體藥物組細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)均較相同照射劑量X線照射ACC-2及ACC-2/CD-TK細(xì)胞組低(P＜0.05);相同照射劑量各相應(yīng)細(xì)胞組在有氧條件下細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)較乏氧條件下低。 結(jié)論1.應(yīng)用電穿孔的方法成功將pIRES-CD、pIRES-TK共同轉(zhuǎn)染ACC-2細(xì)胞,并進(jìn)行RT-PCR鑒定,獲得了預(yù)期的228bp和361bp的片段,表明了目的基因CD和TK已整合到ACC-2細(xì)胞染色體DNA鏈中,并進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。 2.有氧條件下雙自殺基因與其前體藥物共同作用對ACC-2細(xì)胞具有明顯的放療增敏作用而且作用優(yōu)于單自殺基因的應(yīng)用。 3.乏氧條件下雙自殺基因及其前提藥物系統(tǒng)同樣可以明顯提高ACC-2細(xì)胞的放療敏感性而且作用優(yōu)于單自殺基因的應(yīng)用。 4.相同照射劑量下各相應(yīng)細(xì)胞組在有氧條件下的存活分?jǐn)?shù)較乏氧條件下低,這與分子生物學(xué)研究結(jié)果一致。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2810077