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釉基質(zhì)蛋白對正常大鼠與糖尿病大鼠顱骨缺損愈合影響的實驗研究

發(fā)布時間:2020-08-26 16:31
【摘要】:目的: 研究證實釉基質(zhì)蛋白(Enamel matrix proteins, EMPs)可以促進牙周組織包括牙槽骨的再生。本研究的目的是:1.提取并分析確定乙酸法提取的EMPs是釉原蛋白占優(yōu)勢的釉基質(zhì)蛋白,便于下一步的研究;2.探討EMPs作為生長因子對正常大鼠極量顱骨缺損愈合的影響:3.探討EMPs作為生長因子對糖尿病大鼠極量顱骨缺損愈合的影響。 方法: 1.采用乙酸法提取豬發(fā)育期牙胚中EMPs,并進行SDS-PGAE電泳分析。 2.選用20只健康雄性Wistar大鼠,隨機分為兩組,每組10只(第一組左側(cè)顱骨為實驗側(cè),右側(cè)為對照側(cè);第二組右側(cè)顱骨為實驗側(cè),左側(cè)為對照側(cè))。水合氯醛腹腔注射麻醉后,于顱頂手術(shù)區(qū)備皮消毒。在前額做一長約5-6cm的“U”形切口,切開皮膚至顱骨表面,向后翻起“U”形皮瓣,充分暴露手術(shù)區(qū)。在不損傷硬腦膜的情況下,用球鉆在顱骨中線兩側(cè)各做一直徑5mm的圓形標準極量骨缺損。按對照側(cè)和實驗側(cè)分別植入植入物:對照側(cè)100mg/ml PGA (EMPs載體),實驗側(cè)10mg/ml EMPs+100mg/ml PGA,嚴密縫合皮膚。術(shù)后青霉素鈉連續(xù)注射三天,預防感染。觀察并記錄實驗動物的術(shù)后反應(yīng)及生長情況,分別于第4周、第8周過量麻醉法處死大鼠,并進行影像學檢查和組織切片觀察分析。 3.選用25只健康雄性Wistar大鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。過夜禁食后,按60mg/kg的STZ腹腔注射誘導糖尿病大鼠模型。1周后測血糖,血糖≥16.7mmol/L者建模成功。誘導中1只大鼠死亡,其余24只隨機分為兩組,每組12只(第一組左側(cè)顱骨為實驗側(cè),右側(cè)為對照側(cè);第二組右側(cè)顱骨為實驗側(cè),左側(cè)為對照側(cè))。隨后的顱骨缺損手術(shù)、植入物的植入及標本的處理等過程同2.,但處死前需測血糖值,血糖≥16.7mmol/L納入統(tǒng)計。 結(jié)果: 1. EMPs分析顯示:大部分蛋白質(zhì)分子量條帶位于25KDa以下,優(yōu)勢條帶為20KDa、13KDa和分子量更小的區(qū)間,其中20KDa的條帶含量最高。 2.正常大鼠切口愈合良好,無炎癥,無感染,無排異反應(yīng)。X線片示:術(shù)后4周實驗側(cè)與對照側(cè)的極量顱骨缺損范圍均無明顯縮小,但實驗側(cè)缺損邊界出現(xiàn)模糊現(xiàn)象;術(shù)后8周實驗側(cè)與對照側(cè)的極量顱骨缺損范圍均縮小,實驗側(cè)較對照側(cè)縮小的更加明顯,缺損大部分被修復。相對骨密度分析均數(shù)和標準差分別為:4周時,實驗側(cè)31.8±2.9,對照側(cè)25.8±2.85,兩者間具有顯著性差異(p0.05);8周時,實驗側(cè)39.4±3.3,對照側(cè)28.6±3.2,兩者間具有顯著性差異(p0.05)。組織學觀察顯示:4周時,對照側(cè)疏松纖維結(jié)締組織大量存在,炎癥細胞廣泛浸潤,少量成骨細胞存在;實驗側(cè)存在大量致密纖維結(jié)締組織,其內(nèi)部可見大量成條索狀、網(wǎng)狀和團塊狀分布的嗜酸性骨基質(zhì)沉積,部分區(qū)域出現(xiàn)纖維樣骨結(jié)構(gòu);成骨細胞分布廣泛,缺損區(qū)邊界可見部分新骨生成,成骨跡象明顯。8周時,對照側(cè)存在大量疏松的纖維結(jié)締組織,炎癥細胞仍廣泛存在,缺損區(qū)邊界有部分纖維骨樣組織生成,其內(nèi)有一定量的成骨細胞存在。實驗側(cè)有大量骨質(zhì)形成,部分成網(wǎng)織狀,部分成板層狀,局部區(qū)域形成哈佛氏系統(tǒng)和骨髓樣組織結(jié)構(gòu)。 3.糖尿病大鼠偶有精神不振,出現(xiàn)多食、多飲、多尿癥狀,個別感染死亡。X線片示:術(shù)后4周和8周,實驗側(cè)與對照側(cè)的極量顱骨缺損范圍均無明顯的縮小缺損中心及周邊均無明顯的高密度影像。相對骨密度分析均數(shù)和標準差分別為:4周時,實驗側(cè)31.8±6.8,對照側(cè)29.8±6.0,兩者間無顯著性差異(p0.05);8周時,實驗側(cè)34.6±4.6,對照側(cè)31.7±2.6,兩者間無顯著性差異(p0.05)。組織學觀察顯示:術(shù)后4周和8周,對照側(cè)和實驗側(cè)均被薄層纖維結(jié)締組織充填,缺損區(qū)邊界及纖維組織內(nèi)少見成骨細胞,無新骨形成,亦無明顯成骨跡象。 結(jié)論: 1.采用乙酸法從豬的牙胚中提取的釉基質(zhì)蛋白是典型的釉原蛋白占優(yōu)勢的EMPs表現(xiàn)。 2. 10mg/ml的EMPs與其載體PGA聯(lián)合應(yīng)用可以促進正常大鼠顱骨缺損的愈合,有利于新骨形成。 3、10mg/ml的EMPs與其載體PGA聯(lián)合應(yīng)用對糖尿病大鼠顱骨缺損的愈合無明顯促進作用。EMPs對糖尿病大鼠顱骨缺損修復的有效濃度和/或作用與否還有待于進一步研究。
【學位授予單位】:山東大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2011
【分類號】:R782

【參考文獻】

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2 束蓉,李超倫,劉正,王洪海,陳佩麗,劉文;豬釉基質(zhì)蛋白的提取及N末端氨基酸序列分析[J];口腔醫(yī)學縱橫;1999年02期

3 杜巖,吳織芬,萬玲,董廣英;釉基質(zhì)蛋白骨誘導作用的實驗探討[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2005年04期

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5 李溪;向盈盈;龔躍昆;劉勁松;;糖尿病骨折大鼠骨痂組織中成骨細胞增殖和骨鈣素表達與骨形態(tài)發(fā)生蛋白2干預的關(guān)系[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年20期

6 束蓉,張瀕,劉正;釉基質(zhì)蛋白誘導牙周組織再生的量效實驗研究[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2000年01期



本文編號:2805418

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