發(fā)布時間：2020-08-06 11:35

【摘要】：[目的]觀察SD乳鼠下頜髁突軟骨細胞(Mandibular Condylar Chond-rocytes,MCCs)在280mT靜磁場作用下,其軟骨分化過程中Ⅱ型膠原、IHH、X型膠原及Sox9、Runx2的表達變化,以說明靜磁場對髁突軟骨分化過程的影響,為深入探討靜磁場對頜面部軟骨生長發(fā)育的影響及磁生物學效應的臨床應用奠定理論基礎。[方法]取出生2-3天SD乳鼠的下頜髁突軟骨,培養(yǎng)原代髁突軟骨細胞,純化細胞并傳代。將細胞分為空白組(MCC)和磁場組(SMC),SMC組加載280mT靜磁場。采用Ⅱ型膠原免疫組化染色、甲苯胺藍染色鑒定兩組髁突軟骨細胞,后將其培養(yǎng)至第3、8、15天,在掃描電鏡下觀察髁突軟骨細胞表面超微形態(tài)結構。用RT-qPCR法檢測靜磁場對髁突軟骨細胞在第3、8、15天Ⅱ型膠原、IHH、X型膠原mRNA表達的影響;用蛋白質印跡法檢測加載靜磁場后軟骨細胞在第3、8、15天Sox9、Runx2蛋白的表達變化。[結果]1.空白組和磁場組髁突軟骨細胞的Ⅱ型膠原免疫組化染色和甲苯胺藍染色鑒定結果均為陽性。2.在掃描電鏡下觀察到,隨著培養(yǎng)時間增加,磁場組髁突軟骨細胞表面的顆粒狀、疤樣、纖維條索狀結構以及細胞間連接均較空白組增加。3.兩組髁突軟骨細胞培養(yǎng)第3-8天,細胞外基質中Ⅱ型膠原大量分泌,而IHH、X型膠原合成較少,Sox9高表達;第8-15天,IHH和X型膠原大量分泌,Ⅱ型膠原合成減少,Runx2高表達。磁場組髁突軟骨細胞Ⅱ型膠原、IHH、X型膠原及調控因子Sox9、Runx2的表達變化趨勢與空白組基本一致,并且在相同時間點,磁場組的表達量均高于空白組,差異具顯著性。[結論]1.在靜磁場作用下,髁突軟骨細胞表面的超微形態(tài)結構產(chǎn)生一定變化,說明靜磁場可引起髁突軟骨細胞內部結構的變化。2.在加載靜磁場后第3-8天,髁突軟骨細胞大量合成Ⅱ型膠原,細胞處于分化早期階段,靜磁場主要促進Ⅱ型膠原、Sox9的表達;第8-15天,IHH與X型膠原大量分泌,髁突軟骨細胞進入肥大階段,靜磁場主要促進IHH、X型膠原及Runx2的表達。3.靜磁場能促進髁突軟骨細胞特異性基質分泌,促進軟骨細胞的分化。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R782.6
【圖文】：

永磁體靜磁場加載裝置（力田磁電科技有限公司，中國）逡逑高斯計（上海亨通ＨＴ２０，中國）逡逑本實驗采用的永磁體靜磁場加載裝置（圖１）由加載平臺、安裝座、永磁體逡逑１０逡逑

兩組細胞在相同條件下繼續(xù)培養(yǎng)，以后隔日更換培養(yǎng)液。逡逑圖２邋ＳＤ乳鼠髁突軟骨細胞的取材、分離逡逑（圖２ａ：實驗動物，出生２－３天的ＳＤ乳鼠；ｂ：箭頭所指為分離逡逑解剖出的髁突軟骨）逡逑２．２邋ＳＤ乳鼠髁突軟骨細胞鑒定逡逑２．２．１邋ＩＩ型膠原免疫組織化學染色逡逑傳一代后，調整髁突軟骨細胞懸液的密度為４Ｘ１０４個／ｍｌ，吸�。欤恚鞈乙航渝义戏N在預置于培養(yǎng)皿中央的無菌載玻片上，在３７°Ｃ恒溫、５％Ｃ０２飽和濕度培養(yǎng)箱逡逑內孵育。待細胞生長至５０％？６０％，取出載玻片，ＰＢＳ浸洗兩次，４％多聚甲醛逡逑固定１小時，ＰＢＳ沖洗３次。０．４％的Ｔｒｉｔｏｎ邋Ｘ－１００浸泡３０分鐘后ＰＢＳ沖洗３逡逑次，每次３分鐘；新鮮配制的３％過氧化氫封閉內源性過氧化物酶１５分鐘；ＰＢＳ逡逑沖洗３次，每次３分鐘；３７°Ｃ１０％正常山羊血清封閉３０分鐘；滴加兔抗小鼠ＩＩ逡逑型膠原抗體，４°Ｃ過夜；３７°Ｃ復溫１小時，ＰＢＳ沖洗３次，每次３分鐘；辣根過逡逑氧化物酶標記抗兔二抗

邐Ｊｂ＿逡逑圖４邋ＳＤ乳鼠髁突軟骨細胞甲苯胺藍染色鑒定結果（Ｘ邋１００）逡逑（圖４ａ：邋ＭＣＣ甲苯胺藍染色；ｂ：ＳＭＣ甲苯胺藍染色）逡逑２加載靜磁場后ＭＣＣｓ胞體表面超微形態(tài)學結構變化逡逑在掃描電鏡下觀察髁突軟骨細胞，發(fā)現(xiàn)靜磁場作用第３天，細胞多呈短梭形逡逑或多邊形，直徑１０－２０ｕｍ左右，細胞表面有少量突起，空白組細胞表面相對光逡逑滑（圖５ａ，ｂ）；第８天細胞呈類圓形，似蜂窩樣表面的球體，尤其磁場組細胞體逡逑積飽滿，胞體明顯脹大，胞體表面突起增多，呈凹凸不平小丘狀，周邊出現(xiàn)纖維逡逑網(wǎng)狀結構，排列相對規(guī)則（圖５ｃ，邋ｄ）；第１５天，細胞表面明顯可見大量的微絨毛逡逑狀、層狀、疤樣結構，更為凹凸不平，表面顆粒狀物質減少，并可見纖維狀條索逡逑結構變粗大，不規(guī)則排列（圖５ｅ，邋ｆ）。相同時間點的磁場組髁突軟骨細胞胞體表逡逑面突起以及細胞間連接均較空白組細胞多。逡逑ＢＤ逡逑１５逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2782336