【摘要】：[目的] 本課題通過體外實(shí)驗(yàn)研究富血小板纖維蛋白提取液(Platelet-rich fibrin extract, PRFe)對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化、成骨及細(xì)胞骨架的影響,探討富血小板纖維蛋白對(duì)成骨細(xì)胞的作用,以期為富血小板纖維蛋白在臨床的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。 [方法] 1、PRFe制備：健康雄性SD大鼠,腹主動(dòng)脈取血10ml,離心后制取富血小板纖維蛋白(PRF),冷凍后再次離心制取PRFeo 2、鈦片制備：將直徑為10mm、厚度為lmm的TA2純鈦鈦片進(jìn)行酸蝕噴砂(SLA)處理。 3、分組：實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組(P組)和對(duì)照組(D)組,P組使用含PRFe的α-MEM培養(yǎng)液(10%FBS)培養(yǎng)細(xì)胞,D組則使用不含PRFe的α-MEM培養(yǎng)液(10%FBS)。 4、觀察指標(biāo)：(1)甲基噻唑基四唑(MTT)法測(cè)定1d,3d,5d的細(xì)胞增殖數(shù)；(2)堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(cè)1d,3d,5d,7d的細(xì)胞分泌堿性磷酸酶活性情況；(3)茜素紅染色觀察14d,21d細(xì)胞分泌鈣結(jié)節(jié)的情況；(4)激光共聚焦顯微鏡觀察培養(yǎng)后3h、6h、9h、12h的細(xì)胞骨架形態(tài)；(5)熒光實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定CbfalmRNA和OCN mRNA基因分別在3d、7d的表達(dá)；(6)掃描電子顯微鏡觀察細(xì)胞接種于噴砂酸蝕鈦片后1d、3d、5d的細(xì)胞伸展?fàn)顩r。 [結(jié)果] 1、MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖：隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞數(shù)量逐漸增加,在各時(shí)間點(diǎn),P組細(xì)胞的吸光度值均明顯高于D組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2、ALP活性檢測(cè)：隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而增加,P組的增加更為顯著,在各時(shí)間點(diǎn),P組的吸光度值均顯著大于D組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3、茜素紅染色：隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞分泌的鈣結(jié)節(jié)逐漸增多,P組細(xì)胞分泌的鈣結(jié)節(jié)的積分光密度值較D組明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4、激光共聚焦觀察細(xì)胞骨架：隨時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞骨架從圓形逐漸向梭形、不規(guī)則多角形變化,肌動(dòng)蛋白從網(wǎng)狀排列逐漸拉長(zhǎng)、互相平行排列,并橫跨整個(gè)細(xì)胞；在各時(shí)間點(diǎn),P組細(xì)胞骨架較D組更加伸展。 5、熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)成骨基因表達(dá)：隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),兩組細(xì)胞的基因表達(dá)量逐漸增加,將D組3d時(shí)基因表達(dá)水平定義為1,進(jìn)行組內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)化,P組細(xì)胞的Cbfal和OCN基因表達(dá)量顯著高于D組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 6、掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)：隨時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞由較短的偽足逐漸變長(zhǎng)變寬,數(shù)目也隨之增多相互交織成網(wǎng)狀,將細(xì)胞牢固的固定于鈦片表面,在各時(shí)間點(diǎn),P組細(xì)胞較D組細(xì)胞,在鈦片表面有更好的排列伸展。 [結(jié)論] 1、PRF所釋放的多種生長(zhǎng)因子能有效的促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化。 2、PP,F能促進(jìn)細(xì)胞骨架的排列伸展,提高細(xì)胞在鈦片表面的黏附力。
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R783.6

【參考文獻(xiàn)】

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1 王麗萍;張樹標(biāo);范長(zhǎng)斌;方穎;;牙周炎及吸煙對(duì)種植體周圍邊緣骨吸收的影響[J];中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版);2010年02期

本文編號(hào)：2781252