【摘要】：目的 篩查與口腔黏膜白斑(oral leukoplakia, OLK)癌變相關(guān)的腫瘤基因,著重分析JAK-STAT通路中STATs蛋白家族及其磷酸化形式的相關(guān)變化,探討0LK癌變與JAK-STAT通路磷酸化的關(guān)系,而后通過結(jié)合臨床上常用的免疫組織化學(xué)技術(shù)驗(yàn)證通路中的重要基因STAT3在OLK癌變中的表達(dá)變化,初步為本研究應(yīng)用于臨床提供初步的研究基礎(chǔ)。 方法 (1)利用美國SuperArray公司的腫瘤基因芯片篩查6例口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌、6例口腔黏膜白斑和6例正常口腔黏膜組織的差異表達(dá)基因,而后用Real-time PCR技術(shù)、RT-PCR技術(shù)隨機(jī)驗(yàn)證芯片的結(jié)果,統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析芯片中差異表達(dá)基因的表達(dá)變化情況。(2)在基因芯片結(jié)果的基礎(chǔ)上,利用Western Blotting檢測Stat1、Stat3、Stat5、Stat6蛋白及p-Stat1(Tyr701)、p-Stat3(Tyr705)、p-Stat3(Ser727)、p-Stat5(Tyr694)、p-Stat6(Tyr641)蛋白在口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌、口腔黏膜白斑組織中的表達(dá)變化情況。(3)利用免疫組織化學(xué)技術(shù)研究STAT3蛋白在口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌、口腔黏膜白斑和正�？谇火つど掀そM織中的定位與表達(dá)變化。 結(jié)果 從正常口腔黏膜到口腔黏膜白斑再到口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌組織,ACP-2、BCL-2、SOCS-3三個(gè)基因的表達(dá)水平呈連續(xù)遞減趨勢,而CLK-3、CTNNB-1、FKBP-8、GDF-15、NF-1、XRCC-1等六個(gè)基因的表達(dá)水平在三種組織中呈連續(xù)遞增趨勢。進(jìn)一步在蛋白水平Western Blotting研究中發(fā)現(xiàn)：STAT-1和pSTAT-1在OLK組織中及OSCC組織中的表達(dá)水平與其相應(yīng)的對(duì)照相比均顯著增加。STAT-3蛋白和pSTAT-3(Ser727)蛋白在OLK組織的表達(dá)與正�？谇火つは啾�,其表達(dá)明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在OSCC組織中,STAT-3蛋白的表達(dá)水平與正�？谇火つそM織,OLK組織相比均顯著增加；但pSTAT-3(Ser727)蛋白在OLK組織中與對(duì)照組相比表達(dá)上調(diào),而隨后在OSCC組織中的表達(dá)分別與口腔黏膜組織及OLK組織相比時(shí),均出現(xiàn)了下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。pSTAT-3(Tyr705)在三種口腔黏膜組織中均無表達(dá)。STAT-5在OLK組織中及OSCC組織中的表達(dá)水平與其相應(yīng)的對(duì)照相比均顯著增加。即與口腔黏膜組織相比時(shí),OLK組織中的STAT-5的表達(dá)水平顯著提高；分別與正�？谇火つそM織和OLK組織相比時(shí)OSCC組織中STAT-5的表達(dá)水平均高于正常口腔黏膜組織和OLK組織,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而pSTAT-5在三種口腔黏膜組織中均無表達(dá)。STAT-6在OSCC組織中的表達(dá)也顯著增加,高于正�？谇火つそM織和OLK組織,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而pSTAT-6在3中組織中均無表達(dá)。隨后的免疫組織化學(xué)結(jié)果表明,三種口腔黏膜組織中,STAT3主要表達(dá)在細(xì)胞漿,也有少量表達(dá)在細(xì)胞核。STAT3在口腔鱗狀細(xì)胞癌中有88.57%的表達(dá),在口腔黏膜白斑有64.29%的表達(dá),兩者均明顯高于在正�？谇徽衬そM織中的5.88%表達(dá),P0.01,差異有顯著性意義。而在與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)與否方面,發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌組織中STAT3蛋白表達(dá)水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,差異有顯著性(P0.01)。 結(jié)論 ACP-2、BCL-2、SOCS-3CLK-3、CTNNB-1、FKBP-8、GDF-15、NF-1、XRCC-1等九個(gè)基因的共同改變可能是口腔正常黏膜組織經(jīng)OLK轉(zhuǎn)變?yōu)榘┙M織的始動(dòng)因素。pSTAT1(Tyr701)和pSTAT3(Ser727)兩種磷酸化形式的蛋白因子的活化程度以及STAT1、STAT3和STAT5蛋白的表達(dá)量的持續(xù)增加可能直接影響了OLK癌變的進(jìn)程。同時(shí)也排除了pSTAT5(Tyr694)、pSTAT6(Tyr641)在OLK癌變中的作用。結(jié)合臨床病例分析,STAT3在三種口腔黏膜組織表達(dá)量的持續(xù)升高與OLK的癌變程度或進(jìn)展相關(guān)。OSCC組織中STAT3蛋白表達(dá)量越高,發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大。本研究為下一步闡明OLK的癌變的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R739.8
【圖文】：

圖I一10:soCsl和soes3在炎性相關(guān)腫瘤生成中的作用138]Figurel一10RoleofSOCSIandSOCs3ininfammation一assoeiatedtumo麗genesis炎癥作用相關(guān)的二步致癌模型。eLK一3(ene一like物ase3):3個(gè)eLK家族激酶(CLK一l、2和3)均具有兩種狀態(tài)，即催化(eLK)和失活(eL盯)[，9]。鼠科eLK一l(meLK一l)是一種核雙重特異性激酶，能與sR蛋白相互作用，導(dǎo)致核裂解[s9l。人cLK一2和cLK一3(hcLK一2和3)也具有類似作用[59]。但是，cLK一3與腫瘤發(fā)生的關(guān)系尚未見報(bào)道。我們的研究結(jié)果表明，在口腔豁膜正常組織中，CLK一3的表達(dá)明顯低于OLK組織和OSCC組織中的表達(dá)，說明CLK-3可能通過促進(jìn)核裂解作用促進(jìn)了OLK癌變的發(fā)生。CINNB一1(連接素相關(guān)蛋白pl，Catenin一assoeiatedproteinbetal):在調(diào)控轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞附著、Wnt受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、雄激素受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、DNA依

基因組學(xué)以及結(jié)構(gòu)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)Srl…Al…家族蛋白有7個(gè)保守的51…Al，結(jié)構(gòu)域包括氨基端結(jié)構(gòu)域(NHZ)，螺旋一螺旋結(jié)構(gòu)域(coiled一coil)，DNA結(jié)合域(oNA一binding，DBD)，連接子(Lk)，sHZ，酪氨酸激活域(Y)以及轉(zhuǎn)錄激活域(transeriPtionalaetivationdomains，TAD)[7一8]。其中NHZ結(jié)構(gòu)域(o一125殘基)可能與指導(dǎo)s腸訂s的同源二聚化及其失活有關(guān)[91。這一結(jié)構(gòu)域還能協(xié)同DNA結(jié)合至串聯(lián)GAS元件，并參與核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)[8，‘0]。緊鄰的螺旋一螺旋結(jié)構(gòu)域(480一580殘基)保證了DNA結(jié)合域和二聚化結(jié)構(gòu)域之間恰當(dāng)?shù)臉?gòu)象。由于在受體招募和二聚化中的重要作用，SHZ結(jié)構(gòu)域(一575一680殘基)是最高度保守的。酪氨酸活性結(jié)構(gòu)域(一700殘基)與SHZ結(jié)構(gòu)域直接相鄰，從而起到防止自身連接的作用。剩下的梭基端殘基構(gòu)成了TAD，在Srl，Al…家族成員間差異性較大。這種異質(zhì)性為STAT與不同轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子的連接提供了結(jié)構(gòu)上的必要條件。

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本文編號(hào)：2738926