【摘要】： 目的:半導(dǎo)體量子點(diǎn)(Semiconductor quantum dots,QDs)作為一種新型的納米材料,由于具有獨(dú)特的光譜特性和良好的光化學(xué)穩(wěn)定性,它提供了對(duì)活細(xì)胞成像和對(duì)活細(xì)胞內(nèi)分子進(jìn)行長(zhǎng)期追蹤觀察研究的可能,但用量子點(diǎn)標(biāo)記癌細(xì)胞后是否影響其生物學(xué)行為是量子點(diǎn)能否用于腫瘤活細(xì)胞可視化研究的關(guān)鍵所在。本課題利用半導(dǎo)體量子點(diǎn)[CdSe/ZnS]標(biāo)記舌鱗癌細(xì)胞Tca8113,觀察被量子點(diǎn)標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞其生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的改變情況,為半導(dǎo)體量子點(diǎn)用于活體腫瘤細(xì)胞的實(shí)時(shí)原位“在線”研究提供依據(jù)。 方法:首先在激光共聚焦顯微鏡(confocal microscopy,CM)下觀察量子點(diǎn)的發(fā)光顏色,發(fā)光強(qiáng)度和形態(tài),將Tca8113細(xì)胞接種在24孔培養(yǎng)板內(nèi),細(xì)胞貼壁后加入量子點(diǎn)共同培養(yǎng),然后在相差倒置熒光顯微鏡(fluorescence microscope,FM)下觀察量子點(diǎn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的情況。將生長(zhǎng)旺盛的Tca8113細(xì)胞,加入不同高濃度(0.1μMol,1μMol,2μMol)的半導(dǎo)體量子點(diǎn)[CdSe/ZnS],觀察Tca8113細(xì)胞生長(zhǎng)的情況,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。檢測(cè)量子點(diǎn)標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞對(duì)其生物學(xué)行為的影響,包括:細(xì)胞侵襲重建基底膜實(shí)驗(yàn)在transwell小室中進(jìn)行,將穿膜細(xì)胞的平均數(shù)來表示腫瘤細(xì)胞的侵襲能力;Hank’s液輕洗2遍收集未粘附細(xì)胞計(jì)數(shù),每時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取3孔求平均值,計(jì)算不同時(shí)間的粘附率。聚碳酸多孔濾膜表面未鋪matrigel,其余步驟和方法與侵襲實(shí)驗(yàn)相同,以穿膜細(xì)胞的平均數(shù)來表示腫瘤細(xì)胞的趨化運(yùn)動(dòng)能力。 結(jié)果:在激光共聚焦顯微鏡下量子點(diǎn)為接近圓型的橢圓紅色熒光體,最大發(fā)射波長(zhǎng)為605nm,熒光強(qiáng)度為250。加入量子點(diǎn)40分鐘可見量子點(diǎn)開始進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),80分鐘細(xì)胞內(nèi)已有較多的量子點(diǎn),120分鐘已有大量的量子點(diǎn)進(jìn)入細(xì)胞,量子點(diǎn)主要分布在胞漿內(nèi)。對(duì)照組和不同濃度量子點(diǎn)標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)生長(zhǎng)曲線基本一致。用量子點(diǎn)標(biāo)記的Tca8113/QDs細(xì)胞和未標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞,其穿膜細(xì)胞均數(shù)分別為74.6±3.2、76.5±2.8,兩均數(shù)間無顯著差異(P㧐0.05)。在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)(30min、60min、90min、120min)量子點(diǎn)標(biāo)記的Tca8113/QDs細(xì)胞和未標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞的粘附率沒有顯著性差別,說明經(jīng)量子點(diǎn)標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞其粘附能力未發(fā)生改變。量子點(diǎn)標(biāo)記的Tca8113/QDs細(xì)胞和未標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞侵襲至濾膜下表面的細(xì)胞數(shù)目分別為83.8±4.1、85.4±3.7,兩均數(shù)間無顯著差異(P㧐0.05),說明經(jīng)量子點(diǎn)標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞未影響其趨化運(yùn)動(dòng)能力。 結(jié)論:量子點(diǎn)能夠以內(nèi)吞方式進(jìn)入Tca8113活細(xì)胞內(nèi),進(jìn)行細(xì)胞成像,從而可用來進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記,作為活細(xì)胞內(nèi)的標(biāo)記物進(jìn)行顯像奠定了基礎(chǔ)。量子點(diǎn)在激光共聚焦顯微鏡下量子點(diǎn)表現(xiàn)為接近圓型的橢圓紅色熒光體,最大發(fā)射波長(zhǎng)為605nm,熒光強(qiáng)度為250。在Tca8113活細(xì)胞中,量子點(diǎn)主要分布在胞漿內(nèi)。不同濃度量子點(diǎn)(0.1μMol,1μMol,2μMol)標(biāo)記的Tca8113細(xì)胞對(duì)Tca8113細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有影響。經(jīng)量子點(diǎn)標(biāo)記后的Tca8113細(xì)胞的侵襲能力和趨化運(yùn)動(dòng)能力沒有影響。在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)(30min、60min、90min、120min)Tca8113/QDs和Tca8113細(xì)胞的粘附率沒有顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)證明了在Tca8113細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記高密度的[CdSe/ZnS]量子點(diǎn)后對(duì)癌細(xì)胞的侵襲、粘附及趨化運(yùn)動(dòng)能力等生物學(xué)行為沒有影響,為建立基于半導(dǎo)體量子點(diǎn)為基礎(chǔ)的技術(shù)平臺(tái)在活體生理?xiàng)l件下對(duì)腫瘤細(xì)胞和細(xì)胞內(nèi)分子進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)“在線”研究提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R739.8
【圖文】：

半導(dǎo)體量子點(diǎn)[CdSe/ZnS]

26(C)圖 2. 半導(dǎo)體量子點(diǎn)[CdSe/ZnS]對(duì) Tca8113 細(xì)胞的標(biāo)記（倒置相差熒光顯微鏡下，×200）Fig.2 Semiconductor quantum dots’ mark to Tca8113 cell(Under FM, ×20和(C)分別顯示[CdSe/ZnS]在 40 分鐘、80 分鐘和 120 分鐘進(jìn)入 Tca8113 細(xì)nd (C) separately demonstrated the situation when [ CdSe/ZnS ]enters the cell nute, 80minute and 120 minutes

【共引文獻(xiàn)】

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1 季列;周范民;;腦膠質(zhì)瘤組織中MMP-7、整合素αvβ5的表達(dá)及臨床意義[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年10期

2 王瑞年;;胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移機(jī)制研究新進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊(cè));1993年04期

3 于曉Y

本文編號(hào)：2737782