【摘要】：目的研究人牙髓細胞(human dental pulp cells,hDPCs)和人臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)在不同濃度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下細胞因子白介素6(IL-6),白介素10(IL-10),肝細胞生長因子(HGF)的mRNA相對表達量變化。建立hDPCs和hUCMSCs共培養(yǎng)體系,比較共培養(yǎng)組與各對照組細胞因子mRNA及蛋白水平表達的變化,初步探究共培養(yǎng)體系對細胞炎癥因子的調(diào)控作用。方法(1)分別用0μg/mL,1μg/mL,10μg/mL,20μg/mL,50μg/mL濃度的LPS細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)hUCMSCs和hDPCs,于6h,12h,24h,36h,通過MTT法檢測細胞增殖情況,實時熒光定量聚合酶鏈反應(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,QRT-PCR)檢測細胞因子IL-6,IL-10,HGF的mRNA表達水平變化。(2)用含有10μg/ml LPS的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)DPCs,UCMSCs和共培養(yǎng)體系,于6h,12h,24h,36h,MTT法檢測細胞增殖,QRT-PCR及酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測細胞因子IL-6,IL-10,HGF的mRNA表達及蛋白水平變化。結果(1)LPS對牙髓細胞和臍帶間充質(zhì)干細胞增殖、炎癥因子mRNA表達的影響:(1)10μg/mL濃度組細胞量高于對照組(P0.05),20μg/mL,50μg/mL濃度組細胞量低于對照組(P0.05);UCMSCs四個時間點不同濃度組細胞量無統(tǒng)計學差異(P0.05);(2)10μg/mL,20μg/mL,50μg/mL濃度組IL-6,IL-10,HGF mRNA相對表達量在一定時間內(nèi)比對照組表達量高(P0.05);1μg/mL濃度組mRNA相對表達量與對照組表達量無統(tǒng)計學差異(P0.05)。(2)LPS對人臍帶間充質(zhì)干細胞和牙髓細胞直接共培養(yǎng)體系中細胞增殖、炎癥因子表達的影響:(1)6h,12h,36h時,共培養(yǎng)脂多糖組細胞量高于DPCs脂多糖組(P0.05),與UCMSCs脂多糖組無統(tǒng)計學差異;(2)共培養(yǎng)脂多糖組IL-6 mRNA相對表達量低于DPCs脂多糖組,高于UCMSCs脂多糖組(P0.05);(3)12h,24h,36h時,共培養(yǎng)脂多糖組IL-10,HGF mRNA相對表達量高于DPCs脂多糖組,低于UCMSCs脂多糖組(P0.05)。(4)共培養(yǎng)脂多糖組mRNA IL-6/IL-10值與IL-6/HGF值低于DPCs脂多糖組(P0.01);(5)DPCs脂多糖組、共培養(yǎng)脂多糖組IL-6蛋白水平高于DPCs對照組(P0.01);36h時,共培養(yǎng)脂多糖組IL-6蛋白水平低于DPCs脂多糖組(P0.01);(6)DPCs脂多糖組IL-10,HGF蛋白水平高于DPCs對照組(P0.05);共培養(yǎng)脂多糖組IL-10,HGF蛋白水平顯著高于DPCs脂多糖組(P0.01);(7)DPCs脂多糖組蛋白水平IL-6/IL-10值與IL-6/HGF值高于DPCs對照組(P0.01),共培養(yǎng)脂多糖組IL-6/IL-10與IL-6/HGF值低于DPCs脂多糖組(P0.01),且在一定時間范圍內(nèi)與DPCs對照組無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論(1)LPS濃度為10μg/mL時可促進DPCs增殖、且引起細胞因子IL-6,IL-10,HGF表達發(fā)生顯著變化,綜合評價選擇該濃度進行后續(xù)實驗;(2)共培養(yǎng)體系可促進細胞增殖、抑制促炎因子IL-6表達、促進抑炎因子IL-10和HGF的表達,并降低IL-6/IL-10值與IL-6/HGF值。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R78
【圖文】：

圖 1-1：DPCs 和 UCMSCs 細胞形態(tài)Fig1-1:Cellular morphology of DPCs and UCMSCsA DPCs 對照組（×40）B DPCs 脂多糖組（×40）C UCMSCs 對照組（×40）

圖 2-1：DPCs 和 UCMSCs 共培養(yǎng)細胞形態(tài)A 共培養(yǎng)對照組（×40）B 共培養(yǎng)脂多糖組（×40）Fig2-1:Cellular morphology of DPCs co-culture with UCMSCs

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本文編號：2735920