發(fā)布時間：2020-06-20 18:09

【摘要】：背景和目的 通過炎癥,創(chuàng)傷或腫瘤造成的牙周支持組織的水平缺損的重建在臨床上依然是一個難題。用組織工程學方法促進牙槽骨再生修復牙周疾病引起的牙周組織缺損是近年來的研究熱點。骨組織工程主要的瓶頸是形成的組織工程骨與天然的生理骨仍有很大差距�？赡艿闹饕蚴菦]有實現(xiàn)組織工程骨的神經化。 生長因子在骨形成過程起很重要的作用,這主要是通過刺激間充質干細胞向硬組織方向的分化。在過去的幾年里,多種生長因子具有骨再生潛力,包括成纖維細胞生長因子,血小板衍生因子,胰島素樣生長因子,轉化生長因子,血管內皮細胞生長因子,和骨形成蛋白(BMP)。在這些因子中,重組人骨形成蛋白2(rhBMP2)是促進牙周組織再生的最具潛力的因子。除了它可以促進再生骨的量之外,它還可以安全的應用到病人身上,在rhBMP2處理的區(qū)域可以形成正常的骨。但是rhBMP2形成的骨的質量并不那么完美。最主要的缺陷是rhBMP2刺激再生的骨具有比較低的臨床愈合能力,機械性能比較差,還有異位成骨。這些異常阻礙了它對大的骨缺損的臨床應用。因此找到新的方法來改善再生骨的質及量非常必要。 越來越多的證據(jù)表明神經系統(tǒng)和骨的形成,修復和改建密切相關。正常骨組織中有廣泛的肽能神經分布,尤其在成骨活動活躍區(qū)域,新生骨組織中神經支配的現(xiàn)象更為顯著。在人長骨不連患者中,發(fā)現(xiàn)在局部組織中存在神經纖維缺失的現(xiàn)象,并認為失神經支配可能是影響骨折正常愈合的原因之一。在截癱和顱腦外傷伴有四肢骨折的患者中,往往發(fā)現(xiàn)骨折骨痂異常增大,甚至出現(xiàn)關節(jié)周圍異位骨化現(xiàn)象,然而在動物失神經實驗研究中,雖然證實骨痂形成加快且明顯增大,但骨痂密度不規(guī)則,骨痂力學強度明顯減弱。在下牙槽神經切斷的大鼠中,牙槽骨的改建活動被抑制。而rhBMP2再生的骨和這些具有神經損傷的病人或實驗動物具有相似的表現(xiàn)。我們的假說是能夠調節(jié)神經系統(tǒng)的神經來源的生長因子可能也會影響骨的改建。 神經生長因子(NGF)是一種重要的神經營養(yǎng)蛋白,可以促進神經的生長分化,最近也被報道它可以促進骨的改建活動,并且在骨折愈合過程起重要作用。另外,它還可以促進人牙周韌帶細胞骨及牙骨質相關蛋白,骨橋蛋白和堿性磷酸酶的表達,并且它還調節(jié)血管內皮細胞和牙周韌帶細胞的增殖和分化,這表明它在體內促進牙周組織再生的潛力。綜上所述,這些之前的研究表明NGF在促進新骨生成及改建方面可能有效。 因此,本研究將rhBMP2和NGF局部聯(lián)合應用到比格犬三度根分叉缺損處,觀察再生骨的質與量,并觀察再生牙周組織中神經纖維的形態(tài)和分布。 方法 第一部分：本實驗在六條比格犬的下頜2,3,4前磨牙建立了36個炎性三度根分叉缺損模型。rhBMP2和rh β-NGF通過可吸收的凝膠局部應用到牙周缺損處。按拉丁方設計將36顆實驗牙分為6組,分別為：A空白對照組作為對照組A,B空白凝膠組作為對照組B,C凝膠+0.4%(4μ/ml)rhBMP-2,D凝膠+2%(20μg/ml)rhNGF,E凝膠+0.4%(4μ/ml) BMP-2+2%(20μg/ml)rhNGF,F凝膠+0.2%(2μg/ml)rhBMP-2+1%(10μg/ml)rhNGF。八周后處死動物,再生牙周組織的質和量通過掃描電鏡,鈣磷比例及組織學測量進行觀測。 第二部分：本實驗動物手術部分同第一部分。標本處理采用冰凍切片,通過PGP-9.5免疫組織化學染色方法觀察比格犬下頜前磨牙三度根分叉缺損再生牙周膜中神經的量,形態(tài)及分布情況。 結果 第一部分：實驗結果證明骨形成蛋白2單獨應用就可以促進再生骨的量。NGF單獨應用組可以觀察到更多的新骨生成伴隨更高的鈣磷比值。另外,掃描電鏡觀察顯示在這一組中新生的組織中膠原束的直徑比對照組中的高。骨形成蛋白2和神經生長因子聯(lián)合應用的兩組比兩個對照組可以觀察到更高的鈣磷比值,并且伴有膠原纖維表明的更多的鈣化物。另外,兩種生長因子的聯(lián)合應用比任何一種因子的單獨應用促進更多面積的骨生成和更多的牙骨質,兩種生長因子對牙周組織再生存在協(xié)同作用。 第二部分：PGP9.5免疫組織化學染色陽性的纖維可以在所有再生牙周膜中觀察到。但是它們的數(shù)目比較少而且大部分分布比較分散。再生牙周膜中切跡區(qū)域PGP9.5陽性區(qū)域對此區(qū)域的牙周膜面積(除去牙齒,牙槽骨和血管)的百分比(POP)為1.93±0.92%,明顯低于正常對照(3.09±1.12%)。再生的魯菲尼小體僅僅在17個標本中的3個觀測到。與正常牙周膜中的魯菲尼小體相比,再生牙周膜中的具有更少的分支。細的自由神經末梢在再生牙周膜中占主導地位。它們大多數(shù)外形平滑,末端逐漸變細不形成任何末梢。另外,再生的牙周膜中牙周韌帶在牙槽骨和牙骨質的附著比較松散。大多數(shù)再生的神經纖維和血管相鄰,有些是沿牙周膠原纖維排列。有時在牙周組織改建活躍的區(qū)域可以看到神經的生長。 結論 局部應用rhBMP2和rhβ-NGF可能會促進比格犬的三度炎性根分叉缺損再生骨的質和量。魯菲尼小體在再生牙周膜中較少觀察到,神經組織可能參與到牙周組織的改建。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R781.4

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