【摘要】：目的探討油酸(Oleid acid,OA)殺傷牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)及其抑制生物膜形成的作用和可能機(jī)制。方法1、將兩種P.gingivalis菌株W83和ATCC33277在腦心浸液液體培養(yǎng)基(BHI)中增菌,選擇在生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的一定濃度的菌液在含有或不含OA的腦心浸液液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)后,使用結(jié)晶紫染色法檢測(cè)和定量生物膜以確定細(xì)菌形成生物膜的最佳濃度及OA對(duì)兩種菌株生物膜的半數(shù)抑制濃度(IC50)。2、在不同時(shí)間加入IC50濃度OA,培養(yǎng)24小時(shí),結(jié)晶紫染色法檢測(cè)OA對(duì)細(xì)菌及生物膜的影響。3、用IC50濃度OA處理后,與未經(jīng)處理的細(xì)菌樣本比較,通過(guò)掃描電子顯微鏡(SEM)評(píng)估由OA引起的細(xì)菌形態(tài)的變化。4、通過(guò)實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time qPCR)檢測(cè)IC50濃度OA作用兩種菌株后毒力因子基因(hagA,rgpA,kgp)的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果1、P.gingivalis兩種菌株形成生物膜的最佳濃度均為1×10~8/mL。OA對(duì)P.gingivalis W83的IC50為1.55nM,OA對(duì)P.gingivalisATCC33277的IC50為1.76nM。2、當(dāng)生物膜穩(wěn)定形成后,經(jīng)OA處理的生物膜中粘附的細(xì)菌數(shù)量隨OA水平增加而增加(P0.05)。相反,在浮游細(xì)菌中,細(xì)菌數(shù)量與OA水平成比例下降(P0.05)。當(dāng)OA在初始階段被加入細(xì)菌中共培養(yǎng)后,且濃度高于8×IC50時(shí),OA顯著抑制了生物膜的形成以及浮游細(xì)菌的數(shù)量(P0.05)。3、SEM結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,OA顯著引起了P.gingivalis胞體形態(tài)上的變化。4、OA濃度為IC50時(shí),P.gingivalis生物膜中細(xì)菌編碼的與毒力和粘附相關(guān)的基因(hagA,rgpA,kgp)表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。結(jié)論OA對(duì)P.gingivalis具有顯著的抗菌和抗生物膜形成作用。在殺菌方面,OA對(duì)懸浮細(xì)胞比粘附細(xì)胞有更顯著的抑菌作用;在生物膜形成方面,已形成的生物膜對(duì)OA有一定的抵抗作用,而在生物膜形成初始階段OA有顯著抑制作用,并且可以顯著抑制P.gingivalis粘附相關(guān)的基因(hagA,rgpA,kgp)mRNA表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R780.2
【圖文】：

結(jié) 果一、P.gingivalis 生物膜形成的最佳濃度如圖1所示為熒光顯微鏡下觀察的P.gingivalis ATCC33277和W83在1×109cfu/mL，1×108cfu/mL 和 1×107cfu/mL 菌液濃度下所形成的生物膜的形貌。由1×107cfu/m 和 1×109cfu/mL 菌液濃度形成的生物膜結(jié)構(gòu)連接稀疏不均勻，并聚集成簇，而當(dāng)菌液濃度為 1×108cfu/mL 時(shí)，形成的生物膜規(guī)則有一定厚度，均勻，連接緊密。結(jié)晶紫染色后，孔板中三種菌液濃度所形成的生物膜吸附的染料，可見(jiàn)顯著差異，1×108cfu/mL 濃度的孔中染料顏色明顯深于另外兩組（見(jiàn)圖 2）。為了進(jìn)一步說(shuō)明結(jié)論，將所結(jié)合的結(jié)晶紫染料溶于冰乙酸后酶標(biāo)儀檢測(cè) 600nm 處吸光度顯示

同菌液濃度下 P.gingivalis ATCC33277 和 W83 生物膜結(jié)菌液濃度下 P.gingivalisATCC33277 和 W83 生物膜結(jié)晶紫注：**P<0.01 對(duì) P.gingivalisIC50 的檢測(cè)

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