【摘要】：目的：本研究擬通過對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng),探討其生物學(xué)特性,研究脂聯(lián)素受體在人牙周膜成纖維細(xì)胞的表達(dá)情況,以及脂聯(lián)素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的作用,為牙周組織再生的應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：1.收集12～16歲因正畸需要而拔除的健康前磨牙10顆,無菌條件下刮取根中1/3的牙周膜組織,采用玻片覆蓋組織塊法進(jìn)行牙周膜細(xì)胞的原代培養(yǎng),對(duì)人牙周膜組織細(xì)胞進(jìn)行體外傳代及分離純化,倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化及生長增殖情況,并對(duì)所生長細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行免疫組化鑒定,取第三至五代用于實(shí)驗(yàn). 2.檢索Pubmed homorogene,查找脂聯(lián)素受體(Adipo R)引物序列,Adipo R引物由上海生工有限公司合成。抽提牙周膜成纖維細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA后,PCR擴(kuò)增目的片段,瓊脂糖凝膠電泳檢測分析AdipoR1和AdipoR2在人牙周膜成纖維中的表達(dá)情況。 3.選擇免疫組化鑒定為牙周膜成纖維細(xì)胞的同一組織來源培養(yǎng)的第4,5代牙周膜成纖維細(xì)胞,以2×104/ml的細(xì)胞濃度分別接種于96孔板中,24小時(shí)后分別加入脂聯(lián)素(0,5,10,20ng／μl),采用四唑鹽比色法(MTT)法,分別測第1,4,7天的細(xì)胞增殖活性。 結(jié)果：1.玻片覆蓋組織塊法分離培養(yǎng)的細(xì)胞在體外具有良好的增殖能力。免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞波形絲蛋白染色呈陽性；角蛋白染色呈陰性,證明體外原代培養(yǎng)細(xì)胞及傳代細(xì)胞均為中胚層組織來源的牙周膜成纖維細(xì)胞,且無上皮來源細(xì)胞混雜。 2.瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示：Adipo R2在人牙周膜成纖維細(xì)胞中有陽性表達(dá)。 3通過四唑鹽比色法(MTT)法,初步測定脂聯(lián)素在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用。(P0.05)。 結(jié)論：1.采用玻片覆蓋組織塊法體外原代培養(yǎng)的牙周膜細(xì)胞,具有良好的增殖能力； 2.運(yùn)用分子生物學(xué)檢測方法發(fā)現(xiàn)AdipoR2不僅在肝臟中表達(dá),在牙周組織中亦有表達(dá)； 3.初步提示脂聯(lián)素在一定濃度范圍內(nèi)可提高牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖活性,為進(jìn)一步研究脂聯(lián)素對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖、分化、炎癥因子表達(dá)及破骨細(xì)胞相關(guān)調(diào)節(jié)因子表達(dá)的作用奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

白)0.0955士0.00910.2703士0.00300.2423士0.0)0.1250士0.03900.2955士0.0064*0.3115士0.0組)0.1495士0.0161*0.2948士0.1318*0.3123士0.1組)0.1335士0.04460.3075土0.00910.3120士0.0:*與對(duì)照組比較P<0.05測定結(jié)果表明，一定濃度的脂聯(lián)素干預(yù)作用后，促進(jìn)了牙周膜成纖，，并且隨著脂聯(lián)素濃度的增加，這種促進(jìn)作用亦增強(qiáng)，(尸<0.05)，
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R780.2

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李松澤;正畸牙移動(dòng)過程中脂聯(lián)素（adiponectin）在牙周組織中表達(dá)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2698627