【摘要】：背景:牽引成骨技術(distraction osteogenesis,DO)作為活體骨組織工程的一種重要形式,為矯治各種先天及后天獲得性畸形或缺損提供了重要手段。但由于DO的療程相對較長,易引起較多并發(fā)癥和諸多社會心理問題,有待進一步解決。同時,迄今為止,人們對牽引產生的機械張力如何轉化為生物學信號的細胞和分子機制尚不清楚。因此,如何促進新骨生成、牽引過程中對細胞因子的調控成為目前的研究熱點。我們在前期研究中成功的建立了電穿孔介導的基因治療兔下頜骨牽引成骨的動物模型,并證實了電穿孔技術介導的基因治療能促進下頜骨DO過程中早期血管的生成,促進新骨生成與鈣鹽沉積,增強新生骨的骨密度與骨強度。本研究在此基礎上,進一步探索電穿孔技術介導的基因轉染后,下頜骨牽引區(qū)細胞因子表達的變化,以明確其促進新骨生成的機制。 目的:觀察電穿孔介導的基因轉染后幾種關鍵的骨生長因子在牽引區(qū)局部的表達變化,探討基因治療促進下頜骨牽引區(qū)新骨生成的機制,為臨床解決下頜骨牽引成骨的并發(fā)癥提供實驗數(shù)據(jù)與理論依據(jù)。 方法:選用新西蘭大白兔45只,沿雙側下頜骨邊緣切開皮膚,鈍性分離附著下頜骨的肌肉,暴露下頜骨。于下頜骨頦孔處,用微型電動鉆截開下頜骨,于下頜骨斷開處安放2cm牽引器、固定,逐層縫合組織。于術后3天開始牽引,每天0.8mm ,連續(xù)牽引7天。將實驗動物分為5組:A組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg/μl)重組質粒pIRES-hVEGF165-hBMP2;B組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg/μl)重組質粒pIRES-hBMP2;C組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg/μl)重組質粒pIRES-hVEGF165;D組:在牽引區(qū)注射2μg(0.1μg/μl)空質粒pIRES; E組:在牽引區(qū)注射相同劑量的生理鹽水。5組實驗動物均施加電穿孔刺激。各組分別于固定期第7、14、28天行空氣栓塞處死動物,切取牽引區(qū)新生骨組織,進行組織學檢查,免疫組化染色檢測新生骨中的BMP、VEGF、FGF、TGF-β、CyclinsA、D1、E的表達情況。采用圖像分析系統(tǒng)分析。 結果:免疫組化染色顯示BMP、VEGF、FGF、TGF-β、CyclinsA、D1、E主要在肉芽組織中的炎細胞如單核細胞、成纖維細胞及少量沿牽張方向排列的新生幼稚骨小梁表面的成骨細胞、骨細胞和骨周圍結締組織中表達。這些生長因子均在固定7天時表達最強烈,14天時減弱,28天時部分生長因子僅微弱表達或陰性表達。圖像分析結果顯示基因治療組(A、B、C組)的生長因子表達在各時期均明顯高于對照組(D、E組)。 結論:在DO過程中,電穿孔介導的基因治療能有效地促進多種細胞因子的表達,這些細胞因子的高表達對血管生成、細胞的分化與增殖功能起著重要的作用,從而刺激牽引區(qū)骨基質合成和誘導成纖維細胞、成骨細胞,血管內皮細胞、骨細胞的增殖分化等活性功能,促使早期微血管生成,更能有效的促進骨的生長和修復。這可能是基因治療促進牽引間隙新骨生成的分子機理。
【圖文】：

離斷下頜骨

牽張器暴露于體外，，牽引后出現(xiàn)反牙合
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R780.2

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