【摘要】：腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多因素影響的多步驟復(fù)雜過程,由多種基因參與,主要表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞凋亡受阻、分化障礙、增殖失控。在生理情況下,細(xì)胞的增殖、分化、成熟及凋亡受到多種正負(fù)調(diào)控因子的嚴(yán)格調(diào)控,正、負(fù)調(diào)節(jié)信號處于動態(tài)平衡中,維持著生理狀態(tài)的穩(wěn)定。腫瘤發(fā)生機制之一可能是細(xì)胞對負(fù)反饋的抑制物的反應(yīng)性發(fā)生了改變從而使細(xì)胞脫離了正常的生長調(diào)控。BMP信號傳導(dǎo)通路的異常與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),BMP、Smads、靶基因的質(zhì)和量的改變都和人類許多腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。泛素-蛋白酶體降解系統(tǒng)廣泛存在于各種真核細(xì)胞中,參與調(diào)控細(xì)胞多種生理進程。作為該系統(tǒng)中行使調(diào)控降解功能的核心成員,E3泛素連接酶的重要作用已經(jīng)越來越引起人們的重視。E3泛素連接酶Smurf1作為這一系統(tǒng)的重要組成部分,參與調(diào)控組織中BMP通路中分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。本研究采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)使舌癌細(xì)胞中Smurf1蛋白產(chǎn)生高表達(dá),使用Western blot技術(shù)以研究其在舌癌中對Smad1和Smad5蛋白含量的影響,使用MTT法檢測其對舌癌細(xì)胞的影響,為舌癌的治療尋求有效的基因治療方法。 目的 研究舌癌細(xì)胞中Smurf1過表達(dá)對Smad1及Smad5蛋白表達(dá)的影響,并且觀察Smurfl蛋白過表達(dá)對舌癌細(xì)胞增值活性的影響。 方法 利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將含有Smurf1基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進舌癌ca127細(xì)胞中,利用Western blot技術(shù)檢測Smurf1蛋白、smad1蛋白、smad5蛋白含量的變化,利用MTT技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后舌癌細(xì)胞增殖活力的變化,并作統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果 1.含Smurf1基因質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染進舌癌細(xì)胞ca127中。Smurf1基因載體質(zhì)粒中含有綠色熒光蛋白基因,轉(zhuǎn)染后從熒光顯微鏡中觀察到含綠色熒光蛋白的舌癌細(xì)胞,說明質(zhì)粒已成功轉(zhuǎn)染進入舌癌細(xì)胞。 2.轉(zhuǎn)染后舌癌細(xì)胞中Smurf1蛋白表達(dá)量與對照組相比明顯升高,Smad1蛋白含量與對照組相比明顯降低,Smad5蛋白含量與對照組相比明顯降低。 3.MTT法檢測轉(zhuǎn)染后舌癌細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其增殖活力與對照組相比明顯增高。 結(jié)論 1Western Blot檢測到轉(zhuǎn)染后Smurf1蛋白含量與對照組相比明顯升高,而Smad1蛋白及Smad5蛋白含量明顯降低,這說明過表達(dá)的Smurf1對Smad1和Smad5蛋白的表達(dá)產(chǎn)生了抑制作用。 2.MTT檢測顯示高表達(dá)的Smurf1蛋白增強了舌癌細(xì)胞的增殖活力。 3.高表達(dá)的Smurf1蛋白對舌癌細(xì)胞的影響機理與其對Smad1蛋白及Smad5蛋白的抑制作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.86

【參考文獻】

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1 嚴(yán)曉華;章雋宇;陳曄光;;抑制性Smad蛋白對TGF-β超家族信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控及其生理意義[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2009年02期

2 張文嵐,孫文偉,卜麗莎,李廣生;Smad蛋白家族與骨形態(tài)發(fā)生蛋白信號傳導(dǎo)[J];中國地方病學(xué)雜志;2002年04期

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本文編號：2696573