【摘要】：背景: 腫瘤是指在各種致癌因素的影響下,造成細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控,導致細胞克隆性異常增生而形成的。癌癥作為其中的一大類,是目前造成死亡的主要病因之一,其具有局部浸潤及遠處轉移等重要特性,是致人死亡的最主要原因。 抑癌基因(tumor suppressor gene)是指一大類可以抑制細胞分裂及抑制癌變作用的基因,即在機體內對正常細胞增殖起負調節(jié)作用的基因,當抑癌基因缺失、失活或異常表達時,往往會促使細胞失控而呈惡性生長。原癌基因是指具有誘導它所在的細胞癌變的基因,是人或動物細胞內控制細胞生長的固有基因,現認為抑癌基因的負性表達或原癌基因的顯性表達可能是引起細胞異常性增殖或癌變的主要調節(jié)機制,因此,抑癌基因的異常表達與原癌基因的表達,可能是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的主要原因。 PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)基因作為一個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因,定位于染色體10q23,在多種腫瘤的研究中表明,該區(qū)段常出現的雜合子丟失、無義突變、錯義突變等可能是造成腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原因,如:膠質瘤、甲狀腺癌、乳腺癌、口腔鱗狀細胞癌等。在已有研究表明,PTEN基因在正常組織中呈現高表達,在腫瘤組織中出現低表達或表達缺失,所以,PTEN可能是腫瘤發(fā)生、發(fā)展機制中重要的因素之一。目前,對唾液腺腺樣囊性癌的研究較少,因此,進一步研究唾液腺腺樣囊性癌中是否存在PTEN基因的表達異常、是否存在與其他腫瘤相似的低表達、PTEN蛋白的表達是否與PTEN基因的轉錄相關,就顯得很有必要。 目的: 本實驗應用RT-PCR、western bloting法,研究唾液腺正常組織和唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN基因及蛋白的表達差異;了解PTEN基因是否與唾液腺腺樣囊性癌的發(fā)生有關及PTEN蛋白的表達與PTEN基因RNA轉錄是否相關,為了解唾液腺組織腫瘤的發(fā)生與抑癌基因PTEN基因的相關性提供一定的實驗依據,以及為唾液腺腫瘤的實驗室診斷提供相應的實驗依據和理論基礎。 材料與方法: 1、采集病理診斷明確為唾液腺腺樣囊性癌患者的唾液腺腺樣囊性癌組織及其相應的正常組織,按RNA提取說明書提取總RNA,行反轉錄PCR,PCR擴增產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳,用Bio-Rad凝膠圖像成像儀觀察結果,分析唾液腺正常組織和唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN RNA的表達。 2、采集病理診斷明確為唾液腺腺樣囊性癌患者的唾液腺腺樣囊性癌組織及其相應的正常組織,按蛋白質提取Western及IP細胞裂解液說明書提取總蛋白,BCA法測定蛋白濃度,然后,用western免疫印跡(western bolting WB)分析PTEN蛋白表達,經熒光顯影,X片成像,運用Bio-Rad凝膠圖像成像儀觀察結果,分析唾液腺正常組織和唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN蛋白的表達。 結果: 1、在唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN RNA的表達呈低表達,在正常唾液腺組織中PTEN RNA的表達呈高表達狀態(tài)。根據Bio-Rad凝膠圖像成像儀對電泳圖片的灰度值進行定量測定,采用SPSS13.0統計軟件,利用t檢驗進行統計學分析:唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN RNA的表達較正常唾液腺組織明顯降低,并且兩者的差異具有統計學意義(P0.05)。 2、在唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN蛋白的表達呈低表達,在正常唾液腺組織中PTEN蛋白的表達呈高表達狀態(tài)。根據Bio-Rad凝膠圖像成像儀對成像的X線片的灰度值進行定量測定,采用SPSS13.0統計軟件,利用t檢驗進行統計學分析:唾液腺腺樣囊性癌組織中PTEN蛋白的表達較正常唾液腺組織明顯降低,并且兩者的差異具有統計學意義(P0.05),同時,PTEN蛋白在兩者中的表達與PTEN基因的轉錄水平具有一定的相關性。 結論: PTEN基因在唾液腺腺樣囊性癌和正常唾液腺中都存在表達,在正常唾液腺組織中PTEN基因的表達呈高表達狀態(tài),在唾液腺腺樣囊性癌中PTEN基因的表達明顯降低,PTEN基因在兩者中的表達水平的差異在一定程度上可以反映出PTEN基因在唾液腺腺樣囊性癌的發(fā)生過程中起到一定的作用。PTEN基因作為具有多特異性的磷酸酶活性的抑癌基因,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展機制中的起到重要的作用,有可能作為早期診斷、監(jiān)控唾液腺腺樣囊性癌的標記物,以期早期診斷,提高治療效率,提高患者的生存質量,為患者提供更好的服務。
【圖文】：

圖 2： PTEN 基因 3D 結構圖Fig 2：The 3D structure of PTENPTEN 基因突變常出現在人類腫瘤和具有癌變傾向的遺傳性綜合癥，，如 胃乳腺癌、神經膠質瘤、Bannayan-zonana 綜合癥、Cowden 病等，抑癌基因 PTEN控細胞周期、誘導細胞凋亡、體內免疫功能的調節(jié)、胚胎發(fā)育及細胞移行、、生長等生理活動中具有重要的作用[15-18]。1、PTEN 基因阻滯細胞周期，誘導細胞凋亡 PTEN 基因是具有雙特異性酶活性的抑癌基因，能激活 PI3K，使細胞膜上的 PIP3降解、脫磷酸化，保持的低水平，從而阻斷 PI3K/Akt 生長因子信號轉導通路，實現阻滯細胞周期，細胞凋亡的功能。當 PTEN 突變或缺失導致 PIP3脫磷酸化降低，造成 PIP3時 Akt 可磷酸化激活，從而拮抗細胞凋亡，同時造成細胞生長周期異常而表非正常性增殖。

圖 1-1 PTEN RNA 在正常唾液腺組織和唾液腺腺樣囊性癌組織的表達Fig. 1-1 The expression of PTEN RNA in Normal salivary gland and salivary glandadenoid cystic carcinomaM：DNA 標準；0：正常唾液腺組織； 1：唾液腺樣囊性癌組織2.2 定量積分分析表 1-1 PTEN RNA 在正常唾液腺組織和唾液腺腺樣囊性癌組織表達的灰度值分析情況表Table 1-1 Quantitative analysis of PTEN RNA expression between in Normal salivary glandand salivary gland adenoid cystic carcinoma正常組織中 PTEN RNA 的灰度值 腺樣囊性癌中 PTEN RNA 的灰度值PTEN 64727.00±0.0564583.88±0.1464573.28±0.2664644.94±0.3041019.95±0.6232483.46±0.1540462.31±0.3441028.0.19β-actin 64703.7±0.62868.61±064453.2564126.7364727.0061111.9663304.5164682.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R739.8

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本文編號：2694224