【摘要】：研究背景 腫瘤干細胞（cancer stem cells,CSCs）理論認為在腫瘤細胞中存在一類數(shù)量極少的（＜5%)、具有干細胞特性的細胞，具有高度的自我更新、無限增殖和多向分化的潛能。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和放、化療的敏感性中起決定性的作用。這一理論的提出改變了人們對腫瘤發(fā)生、侵襲和治療認識，為研究腫瘤的發(fā)病機理、發(fā)展、復(fù)發(fā)和治療提供了新的思路。尋找高效干細胞標(biāo)志物，分選和鑒別腫瘤干細胞成為腫瘤的研究熱點。醛脫氫酶（aldehyde dehydrogenas，ALDH）家族是一類具有氧化細胞內(nèi)各種醛類成為相應(yīng)的弱羧酸的解毒酶。最近幾年有研究指出醛脫氫酶(ALDH)可以用來富集干細胞樣細胞。乙醛脫氫酶1（aldehyde dehydrogenas1,ALDH1,ALDH1A1）已經(jīng)被用于乳腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、眼癌、造血系統(tǒng)惡性腫瘤、結(jié)直腸癌干細胞研究，并被認為是一種有效的腫瘤干細胞標(biāo)志物。因此，通過ALDH分選舌鱗狀細胞癌Tca8113細胞株中具有干細胞特性的細胞亞群是可能實現(xiàn)的。本實驗擬通過檢測舌鱗癌細胞株中ALDH的表達，以期分選出ALDH~(hig)細胞亞群，并通過體外增殖、誘導(dǎo)分化、無血清培養(yǎng)和動物致瘤等實驗對ALDH~(hig)細胞進行鑒定，以期為尋找舌癌干細胞標(biāo)志物提供實驗依據(jù)。 第一部分舌鱗狀細胞癌醛脫氫酶（ALDH）高表達亞群細胞的分選 目的： 通過檢測醛脫氫酶（ALDH)在人舌鱗狀細胞癌Tca8113細胞系中的表達，分選出ALDH高表達（ALDH~(hig)）亞群細胞。 方法： 檢測人舌鱗癌細胞Tca8113的ALDH的表達，運用流式細胞技術(shù)分選出ALDH高表達（ALDH~(hig)）和ALDH低表達（ALDHlow）亞群腫瘤細胞。 結(jié)果： 人舌鱗狀細胞癌Tca8113細胞系中含有高表達醛脫氫酶（ALDH）活性的細胞亞群，并且含量很低，只有1.3%。 第二部分舌鱗癌ALDH~(hig)亞群細胞的體外增殖、分化和無血清培養(yǎng) 目的: 通過進行體外培養(yǎng)增殖、誘導(dǎo)分化和無血清培養(yǎng)成球?qū)嶒�，了解ALDH~(hig)、ALDHlow和未分選的腫瘤細胞的增殖速度差異，ALDH~(hig)細胞分化情況，和ALDH~(hig)、ALDHlow在無血清培養(yǎng)基里細胞生長情況。 方法: 將相同數(shù)量的ALDH~(hig)、ALDHlow和未分選的腫瘤細胞在傳統(tǒng)的普通培養(yǎng)基（serum supplemented medium,SSM）里進行培養(yǎng)，定期用CCK-8法檢測各組細胞增殖情況，，繪制細胞生長曲線。將分選收集的ALDH~(hig)腫瘤細胞制備成單細胞懸液，接種至含有RPMI1640完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，檢測培養(yǎng)后第3、5、7、9天細胞中ALDH的表達水平。將分選的ALDH~(hig)、ALDHlow細胞制成單細胞懸液，以2x104個/毫升的密度接種至培養(yǎng)瓶，加入無血清培養(yǎng)基（serum-free medium,SFM）,每天觀察細胞球形成情況，每3天換液。 結(jié)果: 在體外增殖實驗中，分選出的ALDH~(hig)腫瘤細胞增殖能力要高于ALDHlow腫瘤細胞和未分選的腫瘤細胞，而且在體外培養(yǎng)的ALDH~(hig)腫瘤細胞中ALDH+比例逐漸下降至分選前的比例，ALDH~(hig)分化形成了ALDH~(hig)和ALDHlow。ALDH~(hig)腫瘤細胞能在SFM中懸浮生長形成腫瘤細胞球， ALDHlow腫瘤細胞大部分死亡，未形成腫瘤細胞球。 第三部分舌鱗癌ALDH~(hig)亞群細胞動物致瘤試驗 目的: 通過動物致瘤實驗了解ALDH~(hig)、未分選的腫瘤細胞致瘤能力的差別。 方法: 將ALDH~(hig)和未分選的腫瘤細胞按不同數(shù)量級接種在裸鼠的背部皮膚下，觀察各組成瘤情況。 結(jié)果: ALDH~(hig)亞群腫瘤細胞比未分選腫瘤細胞致瘤性強。 結(jié)論 舌鱗癌Tca8113細胞系中存在一小群高表達醛脫氫酶的細胞，這群細胞具有增殖力強、多向分化、強致瘤力等腫瘤干細胞的生物學(xué)特性。ALDH可能是舌鱗癌干細胞的標(biāo)志物之一。
【圖文】：

舌鱗癌Tca8113細胞系A(chǔ)LDH活性檢測

32圖 6 ALDHhig細胞動物致瘤實驗Fig 6 Tumorigenicity of ALDHhigsubpopulation cells in tongue squamous cecarcinoma of NOD/SCID MICEA 102個細胞 ALDHhig細胞和未分選細胞均不能成瘤B 103、104個細胞 ALDHhig細胞能成瘤，未分選細胞未能成瘤C 105個細胞 ALDHhig細胞和未分選細胞均能成瘤，ALDHhig細胞瘤體大于未分選細胞瘤體D ALDHhig細胞和未分選細胞形成的瘤體（8 周）C D
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.86

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