【摘要】：[目的]體外分離培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞(human periodontal ligament fibroblasts, hPDLFs)。探討體外不同應(yīng)力刺激對hPDLFs與正畸牙周組織改建相關(guān)的細胞因子基質(zhì)金屬蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表達的影響。進一步研究正畸牙移動過程中牙周組織改建的機械生物力學(xué)機制。 [方法]采用改良組織塊貼附法體外培養(yǎng)hPDLFs并進行細胞傳代,通過細胞形態(tài)學(xué)及免疫組織化學(xué)方法對其進行鑒定,為后續(xù)應(yīng)力實驗提供細胞。運用Forcel四點彎曲細胞力學(xué)加載儀對hPDLFs分別施加動態(tài)張、壓應(yīng)力(強度5000μstrain,頻率0.5Hz)。按總的加力時間分為0、2、6、12h 4個組。利用免疫熒光技術(shù)、激光共聚焦顯微鏡以及流式細胞儀檢測hPDLFs內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)堿性磷酸酶(ALP)以及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達變化；利用Western blot方法檢測動態(tài)張、壓應(yīng)力對hPDLFs MMP-1蛋白表達的影響。 [結(jié)果]采用改良組織塊貼附法成功培養(yǎng)出原代牙周膜細胞,并證實所培養(yǎng)的細胞是中胚層來源的hPDLFs。正常hPDLFs均表達MMP-1、ALP及VEGF。動態(tài)壓應(yīng)力可導(dǎo)致hPDLFs MMP-1的表達在加力6h組升高,ALP的表達在加力2h組降低。動態(tài)張應(yīng)力可導(dǎo)致hPDLFs MMP-1的表達在加力2h組升高,ALP的表達在加力6h組降低。動態(tài)張、壓應(yīng)力均可下調(diào)hPDLFs VEGF的表達；動態(tài)張應(yīng)力作用12h后hPDLFs VEGF的表達回升至對照組水平。 [結(jié)論]本實驗采用改良組織塊貼附法成功培養(yǎng)hPDLFs。MMP-1、ALP及VEGF參與hPDLFs機械應(yīng)力信號傳導(dǎo)過程,上述細胞因子表達變化與體外應(yīng)力性質(zhì)及加力時間存在相關(guān)性。MMP-1及ALP可能作為相關(guān)因子參與正畸牙移動牙周組織改建過程。hPDLFs對動態(tài)張應(yīng)力可能適應(yīng)較快并恢復(fù)VEGF的表達而加快牙周組織的改建。
【圖文】：

結(jié)果.人牙周膜成纖維細胞的生長情況原代培養(yǎng)的細胞最快爬出時間為7天，鏡下見活性組織塊貼壁牢固，周圍透亮。細胞芒刺樣由組織塊向四周放射狀生長，靠近組織塊處細胞密集，細胞形態(tài)不清。細胞團外緣細胞單層生長，形態(tài)清晰，呈長梭形，偶見4個細胞突起，胞核清晰，呈類圓或橢圓形�？梢娚贁�(shù)多角形細胞。傳代后4小時見懸浮細胞重新貼壁，呈短梭形。18小時后恢復(fù)長梭形，細胞隨著數(shù)量的增加呈漩渦狀、放射狀生長。細胞生長4至7天后可以再次傳代，一般傳至第3代基本看不到多角形細胞。第5一10代hPDLFS性質(zhì)穩(wěn)定，形態(tài)一致，胞質(zhì)均勻透亮，生長狀況良好，培養(yǎng)至第10代以后細胞生長時間延長，細胞生長至培養(yǎng)瓶的70%一80%需7天左右，胞質(zhì)出現(xiàn)顆粒，有老化趨勢。(圖l)，一﨑式處

昆明醫(yī)學(xué)院2008級頓}研究生學(xué)位論文2.人牙周膜成纖維細胞鑒定細胞波形絲蛋白(vimentin)染色陽性，細胞胞漿呈現(xiàn)棕黃色(圖ZA、B)，符合中胚層來源的成纖維細胞特征;細胞角蛋白(Cytokeratill)染色陰性(圖ZC、D)，，表明無外胚層來源的細胞。上述結(jié)果顯示，本實驗成功獲得中胚層來源的hPDLFs。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R783.5

【參考文獻】

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本文編號：2689015