【摘要】：背景:顳下頜關(guān)節(jié)(Temporomandibular Joint,TMJ)是人體最復(fù)雜的關(guān)節(jié)之一,它在口腔頜面部進行咀嚼、吞咽、發(fā)音等過程中起重要作用。顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病(Temporomandibular disorders,TMD)是一組與形態(tài)和功能相關(guān)的肌骨骼系統(tǒng)的退行性疾病。顳下頜關(guān)節(jié)退行性變與關(guān)節(jié)盤結(jié)構(gòu)完整性密切有關(guān),其中,以關(guān)節(jié)盤變薄、透明樣變、撕裂和穿孔等不可逆性病變?yōu)樘卣鞯年P(guān)節(jié)疾患約占整個TMD的5%~10%。近年來,組織工程研究為更換不可逆轉(zhuǎn)損壞的TMJ disc提供了新途徑。山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤自組裝組織工程技術(shù)構(gòu)建時,在自組裝基體培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)接種一周后的組織小球體積會有明顯收縮現(xiàn)象,而自組裝基體的收縮不利于關(guān)節(jié)盤細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生及關(guān)節(jié)盤基體的生長。同時,對其機制的研究顯示,細胞代謝可能參與了其中的病理生理過程。面對這一難題,課題組認為有必要對TMJ disc細胞的生理代謝過程進行研究,對TMJ disc細胞能量代謝途徑的研究,可能為闡明上述問題提供幫助和更多依據(jù)。目的:初步探索山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞在不同氧糖環(huán)境下的代謝途徑,了解山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的生理生化環(huán)境與代謝的聯(lián)系,為TMD的防治研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和參考。方法:體外分離、培養(yǎng)山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞,傳代至P2代。P2代細胞于21%O_2完全培養(yǎng)液(A組)、2%O_2完全培養(yǎng)液(B組)、21%O_2無糖培養(yǎng)液(C組)、2%O_2無糖培養(yǎng)液(D組)四種不同環(huán)境下培養(yǎng),其中以21%O_2完全培養(yǎng)液環(huán)境培養(yǎng)的細胞作為對照組,各組分別在給予干預(yù)條件下第12h、24h、36h、48h、60h檢測各項指標(biāo)。熒光倒置顯微鏡觀察不同條件下關(guān)節(jié)盤細胞的形態(tài)變化;CCK8檢測不同環(huán)境下關(guān)節(jié)盤細胞的生長、增殖;Hoechst 33258染色觀察不同條件下關(guān)節(jié)盤細胞的凋亡情況;酶聯(lián)免疫分析(ELISA)檢測關(guān)節(jié)盤細胞乳酸脫氫酶(LDH)、細胞活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)含量的變化。通過Mitotracker染色實驗觀察不同環(huán)境下山羊關(guān)節(jié)盤細胞內(nèi)的線粒體情況。主要結(jié)果:1.熒光倒置顯微鏡下觀察顯示:對照組(21%O_2完全培養(yǎng)液)細胞,5個時間點(12h、24h、36h、48h、60h)細胞多為長梭形,糖剝奪后,無論是常氧還是低氧條件,細胞形態(tài)與對照組相比,均可見大量細胞由長梭形變?yōu)槎噙呅?而單一的低氧條件下,僅見少量細胞由長梭形變?yōu)槎嘟切巍?.增殖與凋亡結(jié)果顯示:與對照組相比較,2%O_2完全培養(yǎng)液環(huán)境下培養(yǎng)的細胞增殖更好。糖剝奪后,無論是常氧還是低氧條件,細胞的增殖力均顯著下降(p0.05),尤其在無糖培養(yǎng)24h,細胞增殖率為負。Hoechst 33258染色顯示各糖剝奪組的細胞出現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象,尤其是在無糖培養(yǎng)24h后,凋亡率持續(xù)升高。而2%O_2完全培養(yǎng)液組的細胞與對照組相比,細胞凋亡率下降(p0.05)。這與CCK8實驗的結(jié)果完全一致。3.細胞內(nèi)LDH結(jié)果顯示:對照組(21%O_2)細胞內(nèi)LDH,自12h開始,持續(xù)下降。2%O_2組、糖剝奪組、2%O_2糖剝奪組均出現(xiàn)先上升后持續(xù)下降的趨勢,24h達到峰值。整體對比發(fā)現(xiàn):只有2%O_2組細胞內(nèi)LDH各時間點濃度均高于對照組,而糖剝奪后的兩組濃度均低于對照組,其中糖剝奪組細胞內(nèi)LDH濃度最低(p0.05)。4.細胞內(nèi)ROS結(jié)果顯示:對照組(21%O_2)細胞內(nèi)ROS先上升,后下降,36h為峰值。2%O_2組呈先上升后下降,又上升的不斷反復(fù)趨勢。糖剝奪組先下降后上升,36h最低。2%O_2糖剝奪組與對照組一致,呈先上升后下降趨勢,36h達到峰值(p0.05)。整體對比,對照組細胞內(nèi)ROS各時間點濃度均高于其他三組,其中糖剝奪組細胞內(nèi)ROS濃度最低(p0.05)。5.細胞內(nèi)SOD結(jié)果顯示:對照組(21%O_2)細胞內(nèi)SOD先持續(xù)下降,后上升,48h為最小值。2%O_2組呈先下降后上升,又下降的不斷反復(fù)趨勢。糖剝奪組呈持續(xù)下降趨勢。2%O_2糖剝奪組呈持續(xù)上升趨勢(p0.05)。整體對比,只有2%O_2組細胞內(nèi)SOD各時間點濃度高于對照組,而糖剝奪后的兩組,細胞內(nèi)SOD低于對照組(不包括2%O_2糖剝奪組12h),其中,糖剝奪組細胞內(nèi)SOD濃度最低(p0.05)。另外,各組中的SOD的濃度總是與ROS存在負相關(guān)。6.Mitotracker對線粒體染色結(jié)果顯示:對照組(21%O_2)細胞內(nèi)線粒體數(shù)量自12h時數(shù)量開始上升,48h后開始下降。與對照組比較,其余三組(低氧組、糖剝奪組、低氧糖剝奪組)的線粒體數(shù)量均少,尤其是糖剝奪后的兩組(低氧組、低氧糖剝奪組)線粒體數(shù)量顯著減少,其中糖剝奪組表現(xiàn)為先上升后下降趨勢,24h為峰值。2%O_2糖剝奪組,線粒體數(shù)量先增多后減少,36h最多。而低氧組并未觀察到明顯的線粒體數(shù)量變化趨勢。整體分析,糖剝奪組線粒體數(shù)量最少(p0.05)。這與ROS檢測結(jié)果基本一致。結(jié)論:2%O_2更利于山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的分解代謝;糖剝奪對山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的分解代謝有顯著下調(diào)作用;2%O_2糖剝奪后初期山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞具有適應(yīng)性反應(yīng),但最終其分解代謝能力下降。
【圖文】：

修復(fù)前口外檢查和輔助檢查

修復(fù)前口外
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R782.6

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本文編號：2672401