【摘要】：目的：本研究擬討論富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblasts，HPDLFs)增殖和遷移能力以及與人骨髓基質(zhì)細(xì)胞（human bone marrow stroma cells,HBMSCs）共培養(yǎng)下的細(xì)胞增殖能力的影響，為PRP在牙周組織再生治療中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法： 1.采用組織塊培養(yǎng)法體外分離培養(yǎng)人PDLFs，檢測(cè)波形絲蛋白的表達(dá)，以確定其生物學(xué)來源；采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)細(xì)胞；PRP由江蘇省血液中心提供。 2、采用MTT法檢測(cè)不同濃度PRP（1%,5%,10%,,20%,30%,50%）對(duì)PDLF增殖能力的影響；transwell系統(tǒng)測(cè)定不同濃度PRP（1%,5%,10%,,20%,30%,50%）對(duì)HPDLFs遷移效果，無血清培養(yǎng)液為陰性對(duì)照，10%新生小牛血清為陽性對(duì)照。 3.將HPDLFs和HBMSCs按1：1接種至transwell系統(tǒng)中，不同濃度PRP（5%,10%,20%,30%,50%）分別加入transwell中，無血清培養(yǎng)液為陰性對(duì)照，10%新生小牛血清為陽性對(duì)照，另設(shè)PDLFs細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)為共培養(yǎng)的陰性對(duì)照，培養(yǎng)7天進(jìn)行MTT測(cè)定。 結(jié)果： 1.通過組織塊法分離培養(yǎng)的HPDLFs表達(dá)波形絲蛋白，屬于中胚層來源的細(xì)胞；通過全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣的外觀，在體外具有良好的增殖能力。 2. 3d、5d和7d時(shí)，各濃度PRP組與陰性對(duì)照組比較細(xì)胞量均顯著增高(P＜0.01)，以20%濃度組最佳(P＜0.01)；各濃度PRP組在7天的培養(yǎng)期內(nèi)均顯示明顯的時(shí)間依賴性。 與陰性對(duì)照相比，不同濃度的PRP均能明顯促進(jìn)細(xì)胞遷移（P＜0.01），以10%的濃度組PRP效果（91.80±2.39）最佳(P＜0.01）。 3. 7天時(shí)，各濃度PRP組的細(xì)胞量均顯著高于陰性共培養(yǎng)對(duì)照組和陰性單獨(dú)培養(yǎng)對(duì)照組(P＜0.01）；并且共培養(yǎng)組比單獨(dú)培養(yǎng)增殖組增殖能力強(qiáng)(P＜0.01）；以10%PRP濃度組最佳(P＜0.01）。 結(jié)論：PRP能促進(jìn)人牙周膜成纖維細(xì)胞的遷移和增殖，對(duì)與骨髓基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)條件下，PRP對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖促進(jìn)效果最佳。
【圖文】：

圖 1 .3 H PD L F 波 形蛋 白 陽性 （× 1 0 0 ） 圖 1 .4 HP D LF 陰性 對(duì) 照 （ ×1 0 0 ） Ta b 1 . 3 vi m en t i n is po s it i v e ly ex pr es se d in HP DL F （ × 10 0 ） Ta b 1. 4 v im en t i n is n eg a t i ve l y ex p r es se d in c on t ro l s （× 1 00 ） 2. 3 HB M S Cs 的形 態(tài)觀 察 在首 次 換 液前 ， 因 培養(yǎng) 液 中 有 大量 紅 細(xì)胞 ，無 法觀 察 細(xì) 胞生 長(zhǎng) 情 況。 首 次 換液 并 經(jīng) PB S 清洗 后 可見 貼 壁細(xì) 胞， 散在 分 布，， 細(xì)胞 體 積 較大 ， 形 態(tài) 似成 纖 維 樣， 隨 著 培養(yǎng) 時(shí) 間 的延 長(zhǎng) ， 細(xì) 胞呈 團(tuán) 簇 樣 生長(zhǎng) ， 可 見 多個(gè) 集 落形 成， 排列 成 漩渦狀 、 放 射狀 ( 見 圖 1. 5 , 1. 6 ) 。 7- 1 4 d 細(xì)胞 集 落 間相 互 融 合 成單 層 。

圖 1 .3 H PD L F 波 形蛋 白 陽性 （× 1 0 0 ） 圖 1 .4 HP D LF 陰性 對(duì) 照 （ ×1 0 0 ） Ta b 1 . 3 vi m en t i n is po s it i v e ly ex pr es se d in HP DL F （ × 10 0 ） Ta b 1. 4 v im en t i n is n eg a t i ve l y ex p r es se d in c on t ro l s （× 1 00 ） 2. 3 HB M S Cs 的形 態(tài)觀 察 在首 次 換 液前 ， 因 培養(yǎng) 液 中 有 大量 紅 細(xì)胞 ，無 法觀 察 細(xì) 胞生 長(zhǎng) 情 況。 首 次 換液 并 經(jīng) PB S 清洗 后 可見 貼 壁細(xì) 胞， 散在 分 布， 細(xì)胞 體 積 較大 ， 形 態(tài) 似成 纖 維 樣， 隨 著 培養(yǎng) 時(shí) 間 的延 長(zhǎng) ， 細(xì) 胞呈 團(tuán) 簇 樣 生長(zhǎng) ， 可 見 多個(gè) 集 落形 成， 排列 成 漩渦狀 、 放 射狀 ( 見 圖 1. 5 , 1. 6 ) 。 7- 1 4 d 細(xì)胞 集 落 間相 互 融 合 成單 層 。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R780.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2666454