【摘要】：齲病是牙體硬組織破環(huán)的一種疾病,由于缺乏細(xì)胞修復(fù)機(jī)制,早期牙釉質(zhì)齲的發(fā)展和逆轉(zhuǎn)取決于牙體硬組織周圍的物理化學(xué)過程(再礦化)。我們前期體外研究發(fā)現(xiàn)Amelogenin生物活性合成肽具有促進(jìn)早期牙釉質(zhì)齲損生物仿生再礦化行為。目的:本課題是在前期的研究基礎(chǔ)之上,擬運(yùn)用等溫滴定量熱儀、透射電子顯微鏡、傅立葉轉(zhuǎn)換紅外光譜、免疫熒光顯微鏡等對Amelogenin生物活性合成肽調(diào)節(jié)早期牙釉質(zhì)齲生物仿生再礦化行為機(jī)制進(jìn)行初探,為研發(fā)具有促進(jìn)早期牙釉質(zhì)齲仿生再礦化作用的制劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:Amelogenin生物活性合成肽含豬釉原蛋白的N末端和C末端氨基酸殘基,由Synpeptide Co Ltd公司使用標(biāo)準(zhǔn)固相肽合成法合成。1.Amelogenin生物活性合成肽與鈣結(jié)合的實(shí)驗(yàn):等溫滴定量熱法用于檢測Ca~(2+)與Amelogenin生物活性合成肽之間的結(jié)合性能。1.25mM的CaCL_2溶液在PH=7,T=37℃,攪拌轉(zhuǎn)速為400r/min條件下滴定0.12mM合成肽溶液,滴定數(shù)據(jù)采用Nano分析軟件進(jìn)行“independent“模式擬合分析,從而得出兩者之間的結(jié)合常數(shù)(KD)、化學(xué)計(jì)量比(N)、反應(yīng)焓(ΔH)和反應(yīng)熵(ΔS)。2.Amelogenin生物活性合成肽對鈣磷化合物生成的影響實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)分為四組:不含多肽溶液組(對照組);50ug/ml多肽溶液組;200ug/ml多肽溶液組;500ug/ml多肽溶液組。等分的CaCL_2和PH調(diào)節(jié)過的KH_2PO_4溶液依次加入到各組溶液中。TEM和SAED分別在15min,45min,4h,24h反應(yīng)時(shí)間對其產(chǎn)物進(jìn)行表征,FT-IR對24h最終礦化產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。3.Amelogenin生物活性合成肽對脫礦牙釉質(zhì)滲透能力實(shí)驗(yàn):牛牙釉質(zhì)塊在脫礦溶液中脫礦三天之后,放入含50ug/ml Amelogenin生物活性合成肽的再礦化溶液中再礦化12天。制備好的仿生再礦化釉質(zhì)塊進(jìn)行間接免疫熒光染色、拍照,觀察Amelogenin生物活性合成肽在釉質(zhì)塊內(nèi)部的分布情況。結(jié)果:1.Amelogenin生物活性合成肽與Ca~(2+)可通過離子形式結(jié)合,結(jié)合常數(shù)為9.915×10~4M~(-1),反應(yīng)化學(xué)量約為1mol的Ca~(2+)與1mol的多肽結(jié)合。2.所有濃度Amelogenin生物活性合成肽組均可通過結(jié)合形成穩(wěn)定無定型磷酸鈣的形式,抑制鈣磷過早轉(zhuǎn)化形成磷酸鈣晶體,而不含多肽對照組迅速發(fā)生磷酸鈣自發(fā)性沉淀反應(yīng)。各組多肽溶液穩(wěn)定形成無定型磷酸鈣抑制晶體過早形成的能力表現(xiàn)為:50ug/ml組200ug/ml組500ug/ml組。且24小時(shí)最終產(chǎn)物中,對照組為隨機(jī)排列的羥基磷灰石,而50ug/ml和200ug/ml多肽溶液組礦化產(chǎn)物為高度有序排列的羥基磷灰石晶體,500ug/ml多肽組仍為有序排列的無定型磷酸鈣納米顆粒。3.仿生釉質(zhì)塊的表層及表層下均能觀察到Amelogenin生物活性合成肽的分布。結(jié)論:1.Amelogenin生物活性合成肽具有與Ca~(2+)結(jié)合的能力,具備Ca~(2+)攜帶器的功能。2.Amelogenin生物活性合成肽通過結(jié)合形成穩(wěn)定無定型磷酸鈣,抑制鈣磷過早轉(zhuǎn)化形成磷酸鈣晶體,可維持飽和溶液中生物可利用的鈣磷,且這種作用隨著多肽濃度變化而變化,同時(shí)Amelogenin生物活性合成肽具有調(diào)節(jié)形成高度有序排列的羥基磷灰石晶體能力。3.Amelogenin生物活性合成肽可滲透進(jìn)入齲損深部的脫礦區(qū)域。
【圖文】：

2圖1 脫礦與再礦化動(dòng)態(tài)過程圖現(xiàn)代牙科學(xué)的一個(gè)重要目標(biāo)就是在不可逆齲洞形成之前通過保守的非手術(shù)性的手段，以達(dá)到終止齲病的發(fā)展、恢復(fù)牙齒的美觀、抗力及功能。目前國內(nèi)外通過再礦化促進(jìn)牙釉質(zhì)早期齲損的修復(fù)方法可分為兩大類：氟制劑處理技術(shù)和非氟制劑處理技術(shù)。迄今為止，氟化物是公認(rèn)的治療早期牙釉質(zhì)齲最有效的再礦化方法[6, 7]。研究表明，氟制劑的再礦化是通過基于殘余晶體的延長生長形成氟磷灰石而實(shí)現(xiàn)的[8, 9]。但是，由于氟化物缺乏指導(dǎo)調(diào)控礦物晶體形成的能力，在生理?xiàng)l件下，其很難在脫礦的牙釉質(zhì)中形成有序的多等級礦物晶體[9]。成熟的牙釉質(zhì)主要由具有多等級結(jié)構(gòu)的羥基磷灰石晶體組成，，這種多等級的結(jié)構(gòu)對于牙釉質(zhì)的機(jī)械性能是必不可少的[10]。因此，理想的再礦化材料應(yīng)盡可能地模擬形成釉質(zhì)晶體高度有序的礦物結(jié)構(gòu)以恢復(fù)牙釉質(zhì)的性能。非氟制劑處理技術(shù)酪蛋白磷酸肽臨床效果尚存爭議

Amelogenin 生 物 活 性 肽 的 氨 基 酸 序 列 ， 即MPLPPHPGHPGYINFSPYEVLTPLKWYQNMIRHPYTSYGYEPMGGWATDKTKREEVD（如圖1.1所示）；本研究所用Amelogenin生物活性合成肽是委托上海杰肽生物科技有限公司（Synpeptide Co Ltd）合成。圖1.1 全長豬釉原蛋白和實(shí)驗(yàn)所用Amelogenin生物活性合成肽的氨基酸序列凍干的Amelogenin生物活性合成肽稱重，4°C條件下超聲振蕩器振蕩48小時(shí)，確保其完全溶解于去離子水中。Amelogenin生物活性合成肽溶液在使用之前，高速離心機(jī)11340g，4℃下離心20分鐘(目的是去塵和微粒雜質(zhì))。2.2 主-客體滴定，收集數(shù)據(jù)0.12mM（1ml）的Amelogenin生物活性合成肽溶液（含10mM HEPES）注入樣品池中，參比池注入蒸餾水，1.25mM（240ul）的CaCL2溶液注入針管中，并在PH=7
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 余擎,吳補(bǔ)領(lǐng);釉原蛋白的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;1999年04期

2 王偉,岳松齡,孫芝琳;人胚牙釉質(zhì)蛋白質(zhì)的分離純化[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;1992年01期

本文編號：2635108