內(nèi)毒素介導的人牙髓細胞損傷及TGF-β、bcl-2調(diào)控作用的實驗研究

發(fā)布時間：2020-04-11 01:40

【摘要】：隨著細菌分子生物學的研究進展，，越來越多的研究表明細菌內(nèi)毒素脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)可通過與可溶性CD14結合，直接作用于實質(zhì)細胞，引起細胞毒性反應，造成細胞凋亡等多種病理改變。已有報道LPS誘導血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞等實質(zhì)細胞凋亡是心血管疾病等的重要發(fā)病機制。由于感染根管、尖周囊腫內(nèi)的厭氧菌LPS的檢出，表明LPS與牙髓病、尖周病的發(fā)病和臨床癥狀密切相關。以往認為牙髓病、尖周病的發(fā)病是以LPS介導的免疫反應為主，但近年來發(fā)現(xiàn)LPS直接對實質(zhì)細胞的損傷可能是其主要的作用機制。牙髓細胞是牙髓組織中的主要細胞成分，擔負著牙齒的營養(yǎng)代謝、感覺和修復等重要功能。在炎癥反應時，可因細菌及其毒性產(chǎn)物作用而死亡，造成牙髓組織壞死。也可通過復雜的網(wǎng)絡調(diào)節(jié)使其增殖、分化為成牙本質(zhì)細胞樣細胞，分泌細胞外基質(zhì)形成牙本質(zhì)橋(dentin bridge，DB)，使牙髓組織獲得自身修復的能力。這種自身修復能力的基礎是牙髓細胞生長旺盛，有效活性成分增加，再生增殖能力的增強。這也是我們追求牙髓活髓保存治療的根據(jù)和目的。以往對牙髓病的研究大都停留在組織形態(tài)學觀察和一些細胞因子的檢測上，關于牙髓損傷修復過程中牙髓細胞增殖、分化、凋亡及其相關基因調(diào)控方面的系統(tǒng)研究迄今未見報道。本研究圍繞上述問題，利用現(xiàn)代分子生物學、細胞生物學等技術手段，進行了如下幾方面的探討：首先建立了人牙髓細胞系，進而采用多種手段探討了LPS對牙髓細胞損傷的形式和機制。通過對不同濃度的LPS對人牙髓細胞作用的形態(tài)學觀察，發(fā)現(xiàn)100μg／ml濃度的LPS可抑制細胞生長，使細胞體積縮�。�200μg／ml濃度的LPS可使個別細胞收縮變圓，發(fā)生類似凋亡樣改變；而400μg／ml濃度的LPS可使細胞腫大、破碎發(fā)生壞死樣改變。MTT檢測分析LPS明顯抑制牙髓細胞增殖，呈時間和濃度依賴關系。從流式細胞儀對細胞增殖周期分析看，處于增殖狀態(tài)的S期的細胞明顯減少，多數(shù)細胞被阻止于G1期，說明LPS可通過阻止牙髓細胞周
【圖文】：

S期細胞,對照組,細胞周期,抑制率