【摘要】：目的： 通過改變E-鈣粘蛋白的N-糖基化以增強腫瘤細胞粘附連接和緊密連接的穩(wěn)定性來抑制腫瘤細胞增殖、侵襲和遷移可能是一種新的腫瘤基因治療方法。本實驗將研究低糖基化的E-鈣粘蛋白質粒轉染Tca8113舌癌細胞對舌癌細胞增殖、侵襲和遷移的影響。 方法： 1、以Tca8113舌癌細胞系作為研究樣本,應用含低糖基化的E-鈣粘蛋白(V13)基因的質粒和含野生型E-鈣粘蛋白(E-cadherin)基因的質粒分別轉染Tca8113舌癌細胞,G418篩選出轉染成功的細胞進行細胞培養(yǎng),并且通過western blot實驗檢測轉染基因的穩(wěn)定表達。 2、通過MTT法繪制細胞生長曲線,觀察細胞的增殖能力； 3、運用流式細胞術檢測各組細胞的細胞周期,以了解細胞的增殖活性； 4、應用BrdU摻入試驗測定各組細胞BrdU陽性的比率,以觀察各組細胞DNA復制的差異； 綜合上述三項實驗的結果判定低糖基化的E-鈣粘蛋白(V13)基因的質粒轉染Tca8113舌癌細胞對細胞增殖活性的影響； 5、通過Transwell小室體外細胞侵襲實驗觀察相同條件下各實驗組細胞穿膜細胞數的差異,以觀察低糖基化的E-鈣粘蛋白(V13)基因的質粒轉染Tca8113舌癌細胞對細胞侵襲性能的影響； 6、通過體外細胞劃痕實驗計算比較各組細胞間劃痕愈合的差異,以得出低糖基化的E-鈣粘蛋白(V13)基因的質粒轉染Tca8113舌癌細胞對細胞遷移能力的影響。 結果： 1. Western blot結果顯示：低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因質粒和野生型E-鈣粘蛋白基因質粒轉染舌癌細胞后均穩(wěn)定表達,以flag抗體作為一抗的western印跡實驗結果顯示,減少翻譯后N-糖基化修飾的低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)的分子量小于野生型E-鈣粘蛋白的分子量,低糖基化E-鈣粘蛋白基因轉染的舌癌細胞表達的低糖基化E-鈣粘蛋白的分子量為120KD,野生型E-鈣粘蛋白基因轉染表達的野生型E-鈣粘蛋白的分子量為150KD,而空白對照細胞無flag標記的蛋白表達。 2.MTT結果顯示：相對于Tca8113空白對照細胞,低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因轉染Tca8113細胞的增殖活性有明顯降低,自48小時后V13轉染細胞的OD比值顯著低于空白對照細胞,而野生型E-鈣粘蛋白轉染的Tca8113細胞的增殖活性則改變不明顯； 3.流式細胞術結果顯示：相對于Tca8113空白對照細胞,低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因轉染Tca8113細胞的S期比率有明顯降低(下調了約18.42%),而野生型E-鈣粘蛋白轉染的Tca8113細胞的S期細胞比率則無顯著變化； 4. BrdU摻入實驗結果顯示：Tca8113空白對照細胞Brdu陽性細胞的比率為最高,野生型E-鈣粘蛋白轉染的Tca8113細胞的Brdu陽性率稍低,兩者相比無顯著差異(P0.05),而低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因轉染的Tca8113細胞Brdu陽性率則顯著降低,與Tca8113對照細胞之間差異顯著(P0.01)即低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因轉染的Tca8113細胞合成DNA的能力明顯減弱； 5. Transwell小室體外細胞侵襲實驗結果顯示：相對于Tca8113空白對照細胞,低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因轉染Tca8113細胞侵襲能力明顯降低,而野生型E-鈣粘蛋白轉染的Tca8113細胞侵襲能力則無明顯改變； 6.細胞劃痕試驗結果顯示：相對于Tca8113空白對照細胞,低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因轉染Tca8113細胞的遷移能力明顯降低,而野生型E-鈣粘蛋白轉染的Tca8113細胞遷移能力則無顯著變化； 結論： 低糖基化E-鈣粘蛋白(V13)基因轉染比野生型E-鈣粘蛋白基因轉染Tca8113舌癌細胞能更顯著地抑制舌癌細胞的體外增殖、侵襲性和遷移性。本研究為抑制腫瘤細胞增殖、侵襲和遷移提供了一種合理、可行的新思路、新途徑,為用低糖基化E-鈣粘蛋白基因轉染抑制腫瘤增殖、侵襲和遷移奠定了實驗和理論基礎。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R739.8

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