發(fā)布時間：2020-04-02 21:12

【摘要】： 腭裂是一種常見的先天性畸形,因其影響因素十分復雜,發(fā)生機制目前仍未明確。近年來一些研究表明,腭中嵴上皮細胞(MEE)、腭突間充質細胞(EPM)以及舌體細胞的增殖和凋亡對腭的正常發(fā)育具有重要作用,與腭裂的形成密切相關。Wnt5a是Wnt信號分子家族中唯一在上皮和間充質中均有表達的成員,并且經(jīng)由Wnt/Ca2+信號通路在胚胎的發(fā)育過程中起到調控作用。以往的研究證實Wnt5a基因敲除小鼠全部外向型生長的組織,包括上下頜骨、四肢、尾以及生殖器等均發(fā)育不良,并且存在初級胚胎A-P體軸延展不足。其機制主要是Wnt5a基因敲除導致進展區(qū)細胞增殖水平的下降。目前,國內外尚沒有文獻報道Wnt家族成員的Wnt5a基因敲除小鼠口腔頜面部尤其是腭部的發(fā)育異常。 本實驗對Wnt5a基因敲除小鼠胚胎頜面部進行冠狀面連續(xù)切片,觀察其繼發(fā)腭的形態(tài);利用BrdU標識法和TUNEL染色,研究側腭突細胞以及舌體細胞在腭突融合期的細胞增殖和凋亡水平,來探索Wnt5a基因敲除小鼠腭裂發(fā)生的機制。 目的:本課題應用Wnt5a基因敲除小鼠,通過觀察細胞增殖和細胞凋亡在腭部發(fā)育和腭裂發(fā)生中表達水平和分布的改變,探究Wnt5a信號分子對頜面部尤其是腭部發(fā)育的調控機制。 方法:本實驗應用的Wnt5a基因敲除雜合子成鼠由美國Harvard大學的Dr. McMahon實驗室贈予,飼養(yǎng)在美國南加州大學Keck醫(yī)學院動物中心,將陰栓陽性的孕鼠記為妊娠0天(gestation day 0,GD0)全部孕鼠分別于GD14、GD15和GD18上午10時處死,處死前20分鐘均按100mg/kg體重腹腔注射BrdU。分離Wnt5a基因敲除和正常對照鼠胚,4%多聚甲醛固定,系列脫水,包埋,5μm冠狀面連續(xù)切片用于HE染色、BrdU標識和TUNEL標記。 結果:與正常對照組相比,Wnt5a基因敲除小鼠胚胎表現(xiàn)如下:1、口腔頜面部形態(tài)學上的明顯異常,主要為上下頜短縮、舌異常隆起并且未能下降、側腭突短縮并缺乏水平上抬而形成腭裂。2、BrdU染色結果顯示腭突融合期的腭間充質細胞以及舌上皮與間充質細胞陽性細胞數(shù)和陽性細胞率與正常對照組相比無顯著性差異,而在腭正中嵴上皮卻未發(fā)現(xiàn)陽性細胞。3、TUNEL標識法結果顯示腭突間充質細胞、舌背上皮細胞及舌體間充質細胞發(fā)生異常增多的TUNEL陽性的凋亡細胞,而在腭正中嵴上皮卻未發(fā)現(xiàn)TUNEL陽性細胞。 結論:1、Wnt5a基因敲除小鼠口腔頜面部發(fā)育異常,主要表現(xiàn)為腭裂和舌形態(tài)及位置異常。2、Wnt5a基因敲除小鼠腭裂發(fā)生與腭正中嵴上皮細胞的增殖和凋亡水平改變以及腭突間充質細胞凋亡水平改變具有相關性;同時舌形態(tài)及位置異常也是其腭裂發(fā)生的重要影響因素。
【圖文】：

光學顯微鏡觀察 Wnt5a 基因敲除小鼠胚胎口腔頜面部冠14.5、HE 染色）對照組：舌體表面已經(jīng)轉變至扁平，并且下降至相當于前腭突生長良好（A）；側腭突前 1/3 部（下頜第一磨牙照）的雙側側腭突已經(jīng)上抬至舌體上方，并且在中線處可見少量殘余 MEE 細胞，左右兩側腭突的 EPM 細胞已（B）；側腭突后 1/3 部（上頜第一磨牙牙胚作為平面參突處于接觸融合的初期，中線處可見若干殘留 MEE 細胞驗組：舌體形態(tài)依舊處于高而窄的狀態(tài)，舌表面凹凸不稍有下降，但依然占據(jù)了固有口腔的大部分空間。前腭常（D）；側腭突前 1/3 部的左右兩側腭突已上抬至舌的行水平方向的生長，但是沒有發(fā)生接觸，即該部位發(fā)生E）；側腭突后 1/3 部的左右兩側腭突在舌的兩側進行垂裂隙的距離大于側腭突前部（F）。（A、B、C 為正常對照

光學顯微鏡觀察 BrdU 陽性細胞在口腔頜面部的表達分布U 陽性細胞表現(xiàn)為胞核的褐色染色。低倍視野可見陽性細頜、下頜、牙胚、腭突以及舌組織(A、D)；Wnt5a 基因以及側腭突間充質的 BrdU 陽性細胞數(shù)量以及占總細胞組相比無顯著差異（B、E）。正常對照組側腭突融合，皮細胞仍可見 BrdU 陽性細胞（C）；Wnt5a 基因敲除小發(fā)生接觸融合，其正中嵴上皮細胞已由復層轉化為單層胞核明顯，但未見 BrdU 陽性細胞（F）。（A、B、C 為正E、F 為基因敲除組；A、D 為 25 倍放大，，B、E 為 100 200 倍放大； T 為舌； D 為牙胚； P 為側腭突；黑色箭頭 MEE 中 BrdU 陽性細胞；紅色箭頭所指為基因敲除小平狀細胞）
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R782.2

【共引文獻】

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本文編號：2612448