【摘要】：目的研究侵入牙周組織細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌對細(xì)胞表達(dá)環(huán)鳥苷-腺苷合成酶(c GAS)的影響。方法將SYTO9標(biāo)記的牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis)以感染復(fù)數(shù)(MOI)為10與人牙周膜細(xì)胞(hPDLCs)共培養(yǎng)24 h后,使用激光共聚焦顯微鏡觀察P.gingivalis對hPDLCs的侵襲情況,并應(yīng)用熒光標(biāo)記活細(xì)胞篩選(FACS)分選出被P.gingivalis入侵的hPDLCs,利用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(q RT-PCR)和Western blot對hPDLCs中c GAS的表達(dá)變化進(jìn)行檢測。此外還利用免疫組織化學(xué)技術(shù)對細(xì)菌感染性牙齦組織和正常牙齦組織中c GAS表達(dá)定位和表達(dá)水平變化進(jìn)行分析。結(jié)果激光共聚焦顯微鏡下觀察,P.gingivalis和hPDLCs共培養(yǎng)24 h后,幾乎所有的細(xì)胞內(nèi)都可觀察到綠色熒光;被P.gingivalis感染的hPDLCs中c GAS表達(dá)水平明顯上調(diào);在牙齦組織中c GAS主要在上皮細(xì)胞和上皮下組織中的炎性細(xì)胞中表達(dá);且細(xì)菌感染性的牙齦組織中c GAS的表達(dá)水平明顯高于正常牙齦組織。結(jié)論侵入hPDLCs內(nèi)的活體P.gingivalis,可以明顯上調(diào)細(xì)胞中c GAS的表達(dá);且在細(xì)菌感染的炎性牙齦組織中c GAS的表達(dá)也明顯升高。該結(jié)果提示c GAS可能參與了牙周組織細(xì)胞中細(xì)菌來源的病原ds DNA的識別。
[Abstract]:Objective to study the effect of bacteria invading periodontal tissue on the expression of cyclic guanosine adenosine synthase (c GAS). Methods SYTO9 labeled porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) was co-cultured with human periodontal ligament cells (hPDLCs) for 24 h with complex (MOI) of 10. The invasion of hPDLCs by P.gingivalis was observed by confocal laser microscopy. The expression of c GAS in hPDLCs was detected by real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (Q RT-PCR) and Western blot. The (FACS) was screened by fluorescent labeled living cells and the hPDLCs, which had been invaded by P.gingivalis was detected by real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (Q RT-PCR) and Western blot. The expression localization and expression level of c GAS in bacterial infected gingival tissues and normal gingival tissues were analyzed by immunohistochemistry. Results under confocal laser microscope, green fluorescence was observed in almost all cells after co-culture of P.gingivalis and hPDLCs for 24 h, and c GAS expression in hPDLCs infected with P.gingivalis was up-regulated. In gingival tissue, c GAS was mainly expressed in epithelial cells and inflammatory cells in subcutaneous tissue, and the expression level of c GAS in bacterial infective gingival tissue was significantly higher than that in normal gingival tissue. Conclusion in vivo P.gingivalis invading into hPDLCs can significantly up-regulate the expression of c GAS and increase the expression of c GAS in inflammatory gingival tissues infected by bacteria. These results suggest that c GAS may be involved in the identification of pathogenic ds DNA derived from bacteria in periodontal tissue cells.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院口腔科;南方醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81500870) 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院院長基金(2013C017)~~
【分類號】：R781.4

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