【摘要】：[目的]1、建立SD大鼠乳鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨、膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨體外分離培養(yǎng)成骨細(xì)胞的原代及傳代培養(yǎng)模型；2、對來源于顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨、膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨的成骨細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)觀察,探討其生物學(xué)活性；3、進(jìn)一步研究顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨、膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨來源的成骨細(xì)胞的增殖與成骨活性。 [方法]1、分別取顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨、膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨組織進(jìn)行成骨細(xì)胞的培養(yǎng),兩種成骨細(xì)胞均采用Ⅰ型膠原酶消化法進(jìn)行原代培養(yǎng),并采用“差速貼壁法”進(jìn)行兩種細(xì)胞的純化培養(yǎng),在倒置顯微鏡下連續(xù)觀察兩種成骨細(xì)胞的生長狀況、形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特性；2、通過HE染色、ALP染色、鈣化結(jié)節(jié)茜素紅S染色,鑒定兩種不同來源第4代成骨細(xì)胞；3、采用細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT生長曲線及流式細(xì)胞周期的測定來比較兩種不同來源成骨細(xì)胞的增殖能力；4、通過檢測堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨鈣素(osteocalcin, OC)和Ⅰ型膠原(collagen I, COL-I) mRNA的表達(dá)量,比較兩種不同來源成骨細(xì)胞的成骨能力。 [結(jié)果]1、兩種不同來源成骨細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)無明顯差別,大約培養(yǎng)24h后即可貼壁、伸展,貼壁時細(xì)胞均較小,呈星形、三角形及短梭形,胞核不明顯,隨著細(xì)胞生長分化,細(xì)胞表面有突觸并相互之間連結(jié),彼此間融合后向多層生長。傳代生長至第4代時,細(xì)胞形態(tài)胞體大,形態(tài)以多角形、長梭形為主,胞核明顯增大,同時細(xì)胞外基質(zhì)分泌增多,并包裹細(xì)胞,繼而形成細(xì)胞團(tuán)塊,透光性減弱,最終形成鈣結(jié)節(jié),符合成骨細(xì)胞的生長特性； 2、兩種不同來源成骨細(xì)胞HE染色、ALP染色、鈣化結(jié)節(jié)茜素紅S染色呈現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng),經(jīng)鑒定為成骨細(xì)胞； 3、細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞量明顯低于膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05); MTT生長曲線結(jié)果顯示,顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞在接種后4d進(jìn)入對數(shù)生長期,第8d達(dá)到峰值,此后進(jìn)入平臺期及生長衰減期,膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞在接種后3d進(jìn)入對數(shù)生長期,第7d達(dá)到峰值,此后進(jìn)入平臺期及生長衰減期；流式細(xì)胞生長周期結(jié)果顯示,顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞G0/G1期比例為62.90±3.15%,膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞G0/G1期比例為52.10±5.24%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；顳下頜關(guān)節(jié)G2/S/M期比例為37.10±2.15%,膝關(guān)節(jié)G2/S/M期比例為47.90±3.24%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05) 4、在同一時間顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞ALP、COL-I的表達(dá)量較膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；在同一時間顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞OC的表達(dá)量較膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；在不同時間顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞組內(nèi)及膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞組內(nèi)ALP的表達(dá)含量隨著培養(yǎng)時間的延長逐漸降低,而COL-I、OC則相反,表達(dá)量逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)； [結(jié)論]1、來源于SD大鼠乳鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨及膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨的原代細(xì)胞,經(jīng)體外培養(yǎng)均可得到均一性好、具有典型成骨細(xì)胞形態(tài)特征的成骨細(xì)胞； 2、兩種不同來源的細(xì)胞經(jīng)鑒定為成骨細(xì)胞； 3、本實(shí)驗(yàn)細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT及流式細(xì)胞周期結(jié)果顯示顳下頜關(guān)節(jié)髁突來源的軟骨下骨成骨細(xì)胞增殖能力低于膝關(guān)節(jié)脛骨來源的軟骨下骨成骨細(xì)胞； 4、本實(shí)驗(yàn)ALP、COL-I定量檢測結(jié)果顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞成骨能力在ALP、COL-I方面強(qiáng)于膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞,這與兩種關(guān)節(jié)成骨細(xì)胞增殖能力比較的結(jié)論相反,呈反比關(guān)系；而OC的檢測結(jié)果提示顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨下骨成骨細(xì)胞成骨能力在OC方面弱于膝關(guān)節(jié)脛骨軟骨下骨成骨細(xì)胞,可能的原因是OC的表達(dá)和成骨細(xì)胞的數(shù)目及增殖狀態(tài)呈正相關(guān),顳下頜關(guān)節(jié)來源的成骨細(xì)胞增殖活性弱于膝關(guān)節(jié)來源的成骨細(xì)胞,故顳下頜關(guān)節(jié)來源的成骨細(xì)胞OC成骨表達(dá)能力低于膝關(guān)節(jié)來源成骨細(xì)胞的OC表達(dá)能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R782.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2333822