發(fā)布時(shí)間：2018-10-16 14:11

【摘要】：牙周炎是常見的慢性炎癥性疾病，它可以導(dǎo)致牙周組織不可逆性的破壞，同時(shí)炎癥可以刺激血管形成，破壞的牙周組織處有大量的炎性肉芽組織形成。牙周膜干細(xì)胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）定植在牙周膜中并具有多向分化能力。有研究證實(shí)間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells， MSCs）的分化是受組織微環(huán)境調(diào)節(jié)的。同樣牙周膜干細(xì)胞的分化也受組織微環(huán)境的調(diào)控。有報(bào)道顯示，由于炎癥微環(huán)境中存在大量的血管形成因子，這些因子有利于干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化。那么牙周炎癥微環(huán)境是否促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的內(nèi)皮向分化以及調(diào)節(jié)其內(nèi)皮向分化的機(jī)制還不清楚�；|(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（stromal cell derived factor-1α，SDF-1α）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是存在于牙周炎癥微環(huán)境中與牙周炎發(fā)展密切相關(guān)的重要因子。SDF-1α是重要的血管形成因子，它可以誘導(dǎo)趨化因子受體4[chemokine(c-x-c motif) receptor4，CXCR4]陽性表達(dá)的間充質(zhì)干細(xì)胞分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞。促炎因子TNF-α是SDF-1α/CXCR4軸的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者，TNF-α可以通過上調(diào)SDF-1α或CXCR4的表達(dá)促進(jìn)SDF-1α/CXCR4軸介導(dǎo)的反應(yīng)。在本研究中將初步觀察TNF-α和SDF-1α/CXCR4軸在牙周膜干細(xì)胞內(nèi)皮向分化中的作用及二者之間的調(diào)控關(guān)系。 研究目的： 初步探討炎癥微環(huán)境下牙周膜干細(xì)胞內(nèi)皮向分化能力及其分子機(jī)制。 研究方法： 1.采用酶消化聯(lián)合組織塊法培養(yǎng)正常及炎癥牙周組織來源的牙周膜干細(xì)胞；克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察兩種干細(xì)胞的克隆形成能力；流式細(xì)胞儀檢測兩種干細(xì)胞表面分子標(biāo)志物的表達(dá)；成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色并進(jìn)行定量分析比較兩種干細(xì)胞的成骨分化能力。 2.Real-time PCR檢測兩種干細(xì)胞中SDF-1α、CXCR4表達(dá)的差異；SDF-1α誘導(dǎo)兩種干細(xì)胞，Real-time PCR檢測血管內(nèi)皮相關(guān)基因CD31、vWF的表達(dá)差異；Matrigel基質(zhì)膠管腔形成實(shí)驗(yàn)觀察兩種干細(xì)胞管腔形成情況，倒置顯微鏡下拍照，統(tǒng)計(jì)管腔形成數(shù)量并進(jìn)行比較。 3.CCK-8法檢測TNF-α對牙周膜干細(xì)胞生長的影響；Real-time PCR檢測TNF-α對牙周膜干細(xì)胞SDF-1α、CXCR4表達(dá)的影響。 4.利用Real-time PCR和Western Blot比較單純SDF-1α誘導(dǎo)組、TNF-α預(yù)處理后SDF-1α誘導(dǎo)組、TNF-α預(yù)處理后AMD3100阻斷再加SDF-1α誘導(dǎo)組的血管內(nèi)皮相關(guān)基因CD31、vWF、KDR和蛋白vWF、VE-cadherin的表達(dá)情況；Matrigel基質(zhì)膠管腔形成實(shí)驗(yàn)觀察TNF-α預(yù)處理后SDF-1α誘導(dǎo)組和TNF-α預(yù)處理后AMD3100阻斷再加SDF-1α誘導(dǎo)組的管腔形成情況。 研究結(jié)果： 1.原代培養(yǎng)的兩種牙周膜干細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)為長梭形并呈漩渦狀或放射狀排列，具有間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)特征及克隆形成能力；流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示兩種干細(xì)胞均陽性表達(dá)CD105、CD90、CD29、CD146，陰性表達(dá)CD34、CD45、CD31；茜素紅染色顯示經(jīng)誘導(dǎo)后的兩種干細(xì)胞均可見礦化結(jié)節(jié)形成，定量分析結(jié)果顯示炎癥牙周組織來源的牙周膜干細(xì)胞成骨能力較弱。 2.Real-time PCR結(jié)果顯示炎癥牙周組織來源的牙周膜干細(xì)胞低表達(dá)SDF-1α、高表達(dá)CXCR4；兩種干細(xì)胞經(jīng)SDF-1α誘導(dǎo)后，，血管內(nèi)皮相關(guān)基因CD31、vWF表達(dá)水平和管腔形成能力均明顯高于未經(jīng)SDF-1α誘導(dǎo)的對照組，兩種細(xì)胞間相比，經(jīng)SDF-1α誘導(dǎo)后的炎癥牙周組織來源的牙周膜干細(xì)胞中的CD31mRNA、vWF mRNA的表達(dá)水平和管腔形成能力均明顯高于正常牙周組織來源的牙周膜干細(xì)胞。 3.CCK-8法結(jié)果顯示1ng/mL TNF-α和10ng/mL TNF-α對牙周膜干細(xì)胞生長無明顯影響，100ng/mL TNF-α明顯抑制牙周膜干細(xì)胞的生長；Real-time PCR結(jié)果顯示10ng/mL TNF-α抑制牙周膜干細(xì)胞表達(dá)SDF-1α，促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞表達(dá)CXCR4。 4.Real-time PCR和Western Blot顯示牙周膜干細(xì)胞經(jīng)TNF-α預(yù)處理后加SDF-1α誘導(dǎo)組其血管內(nèi)皮相關(guān)基因和蛋白表達(dá)水平均明顯高于單純SDF-1α誘導(dǎo)組；同時(shí)經(jīng)TNF-α預(yù)處理后加入CXCR4抑制劑AMD3100再加SDF-1α誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)組，血管內(nèi)皮相關(guān)基因和蛋白表達(dá)水平以及管腔形成能力均明顯降低。 結(jié)論: 炎癥微環(huán)境可以促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞的內(nèi)皮向分化能力，其分子機(jī)制為TNF-α通過上調(diào)牙周膜干細(xì)胞表達(dá)CXCR4，使其對環(huán)境中的SDF-1α更加敏感，從而使牙周膜干細(xì)胞的內(nèi)皮向分化能力增強(qiáng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R781.42

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2274613