發(fā)布時間：2018-07-12 08:50

  本文選題：Ins2-cre世系細胞 + Wnt/β-catenin信號��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:糖尿病(Diabetes mellitus,DM)現(xiàn)已成為僅次于腫瘤和心血管的第三大致死率較高的疾病,是在成年人中頗為常見的一種慢性代謝性疾病。糖尿病以胰島素缺乏為主要癥狀。而在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,糖尿病與口腔疾病已成為公認的互相影響的疾病之一。胰島素因其與機體血糖水平的密切關(guān)系而受到了廣泛的關(guān)注。胰島素是由胰腺內(nèi)的胰島β細胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。胰島素是人體內(nèi)唯一降低血糖的激素,在生長發(fā)育中發(fā)揮著重要的作用。近年來,為了研究胰島素相關(guān)基因在胰島素合成及分泌中的作用,研究人員構(gòu)建了包括Tg(Ins2-cre)25Mgn在內(nèi)多種轉(zhuǎn)基因小鼠,同時在研究中發(fā)現(xiàn)ins2-cre不僅在胰腺中有所表達,在其他與內(nèi)分泌調(diào)節(jié)有關(guān)的組織中也有所表達,這些發(fā)現(xiàn)均表明,ins2-cre的表達不僅僅局限于胰腺的β細胞內(nèi),可能還存在于多種組織器官內(nèi)。然而到目前為止,對胰島素基因調(diào)控下的細胞世系在動物體內(nèi)的整體分布仍然缺乏全面具體的研究。細胞世系追蹤(cell lineage tracing)是一種對動物體內(nèi)特定細胞進行追蹤的技術(shù),在在動物發(fā)育早期對細胞進行特殊標(biāo)記,經(jīng)過一段時間后,通過檢測標(biāo)記物來研究被標(biāo)記細胞的遷徙或者改變的一種新興的生物學(xué)技術(shù)。此技術(shù)具有簡單直觀的優(yōu)點,可以在保證細胞存活的前提下對細胞進行鑒定和示蹤,已成為現(xiàn)今研究細胞發(fā)育學(xué)的重要工具之一。利用Cre/Loxp系統(tǒng)標(biāo)記細胞,使特定的細胞群體及其子代都攜帶有該報告蛋白,可以很好的研究特定細胞群體的遷徙分化。在本實驗中,我們將利用Cre/Loxp位點特異性重組系統(tǒng)在小鼠體內(nèi)追蹤Ins2表達細胞的世系圖譜,及利用該系統(tǒng)研究Wnt/β-catenin信號通路在Ins2細胞群體的遷移及命運決定過程的作用;同時探索這些細胞遷徙部位的胰島素存在狀態(tài)。目的:獲得Ins2-cre世系細胞在小鼠體內(nèi)的分布圖譜,探索Wnt/β-catenin信號通路在Ins2-cre世系細胞遷徙和發(fā)育過程中的作用,檢測Ins2-cre世系細胞遷徙部位的胰島素存在狀態(tài),檢測頜下腺在應(yīng)激狀態(tài)下胰島素的存在及分泌狀況。方法:1.利用Cre/loxp系統(tǒng)標(biāo)記細胞并觀察Ins2-cre世系細胞的遷徙位點及時間;2.通過分析β-catenin條件性敲除小鼠,研究Wnt/β-catenin信號通路在Ins2世系細胞遷徙和分化過程中的作用3.用免疫組化和免疫熒光等方法檢測在Ins2-cre世系細胞內(nèi)的胰島素存在狀態(tài);4.建立小鼠高血糖應(yīng)激狀態(tài)的動物模型,運用免疫熒光和實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantificational Real-time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)等方法檢測頜下腺在應(yīng)激反應(yīng)的條件下胰島素的分泌狀況。結(jié)果:1.成功觀察到在Ins2-cre世系細胞在成年小鼠體內(nèi)的遷徙部位:主要有胰腺,頜下腺,大腦;2.通過交配和篩選得到β-catenin功能完全缺失的小鼠。成功觀察到在Ins2-cre世系細胞在β-catenin功能完全缺失的小鼠體內(nèi)出現(xiàn)的起始時間:在小鼠體內(nèi)可從胚胎第9天開始出現(xiàn),直至成年;其體內(nèi)的ins2-cre世系細胞的遷徙位點增加,主要有胰腺,頜下腺,嘴巴,上顎,舌體,牙齒及垂體。3.Ins2-cre世系細胞內(nèi)存在有表達胰島素陽性的細胞。4.成功建立高血糖應(yīng)激狀態(tài)的小鼠動物模型,檢測到頜下腺在應(yīng)激狀態(tài)下有胰島素存在。結(jié)論:Ins2世系細胞在小鼠體內(nèi)可遷徙至多個器官組織,在這些組織中可能有胰島素的存在;Wnt/β-catenin信號通路會減少Ins2世系細胞的遷徙位點;頜下腺在應(yīng)激狀態(tài)下可能會分泌胰島素以維持機體的穩(wěn)態(tài)。
[Abstract]:Background: Diabetes mellitus (DM) is now the third most fatal disease after tumor and cardiovascular disease. It is a common chronic metabolic disease among adults. Diabetes is the main symptom of insulin deficiency. In the field of oral medicine, diabetes and oral diseases have become recognized as one of the other diseases. Insulin is a protein hormone secreted by the pancreatic islet beta cells stimulated by endogenous or exogenous substances in the pancreas. Insulin is the only hormone in the human body to reduce blood sugar and plays an important role in the growth and development of the pancreas. In recent years, in order to study the role of insulin related genes in the synthesis and secretion of insulin, researchers have constructed a variety of transgenic mice, including Tg (Ins2-cre) 25Mgn. In the study, it was found that ins2-cre was not only expressed in the pancreas, but also expressed in other tissues related to internal secretion regulation. It has been shown that the expression of ins2-cre is not limited to the beta cells of the pancreas and may exist in a variety of tissues and organs. However, to date, the overall distribution of the cell lineage in the animals under the regulation of insulin gene is still lack of a comprehensive and specific study. The cell lineage tracing is a kind of animal body. A technique in which specific cells are traced in the early stages of animal development. After a period of time, a new biological technique is used to study the migration or change of labeled cells by detection of markers. This technique has a simple and intuitive advantage and can be used to ensure cell survival on the premise of cell survival. Identification and tracing have become one of the most important tools in the study of cell development today. Using Cre/Loxp system to mark cells so that a specific cell population and its progeny are carried with this reporter protein, it is very good to study the migration and differentiation of specific cell populations. In this experiment, we will use the Cre/Loxp specific recombination system in this experiment. The mice in vivo traced the lineage map of Ins2 expression cells, and used this system to study the role of Wnt/ beta -catenin signaling pathway in the migration of Ins2 cells and the fate determination process, and also to explore the status of insulin in the migratory parts of these cells. Objective: to obtain the distribution map of Ins2-cre lineage cells in mice and explore Wnt/ beta -ca. The role of tenin signaling pathway in the migration and development of Ins2-cre lineage cells, detecting the status of insulin in the migratory parts of the Ins2-cre lineage, detecting the existence and secretion of insulin in the stress state of the submandibular gland. Methods: 1. using the Cre/loxp system to mark the cells and observe the migration sites and time of the Ins2-cre lineage cells. 2. by analyzing beta -catenin conditional knockout mice, the role of Wnt/ beta -catenin signaling pathway in the migration and differentiation of Ins2 lineage cells was examined by immunohistochemical and immunofluorescence methods to detect the state of insulin in the Ins2-cre lineage cells; 4. the animal model of the stress state of hyperglycemia in mice was established and immunofluorescence was used. And real-time quantitative polymerase chain reaction (Quantificational Real-time Polymerase Chain Reaction, Q RT-PCR) and other methods to detect the secretion of insulin under the stress response of the submandibular gland. Results: 1. the migration sites of the Ins2-cre lineage cells in the adult mice were successfully observed: the main pancreas, submandibular gland, and the brain; 2. pass. Copulation and screening of mice with complete deletion of beta -catenin function. The onset time of the Ins2-cre lineage in mice with complete deletion of the beta -catenin function was observed. In mice, the mice could begin to appear from the ninth day of the embryo to adulthood; the migration sites of the ins2-cre lineage cells in the body increased, mainly with the pancreas, and the jaw. In the cells of the lower glands, the mouth, the jaws, the tongue, the teeth and the pituitary.3.Ins2-cre cells, there are insulin positive cells,.4., which successfully establish the mice model of hyperglycemic stress, and detect the presence of insulin in the stress state of the submandibular glands. Conclusion: the Ins2 lineage cells can migrate to many organ tissues in the mice. These Insulin may exist in the tissue; the Wnt/ beta -catenin signaling pathway reduces the migration site of the Ins2 lineage cells; the submandibular gland may secrete insulin to maintain the body's homeostasis under stress.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.1;R78

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本文編號：2116623