本文選題：銀杏葉提取物 + 破骨細(xì)胞��； 參考：《吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年06期

【摘要】：目的:探討不同濃度銀杏葉提取物(GBE)對(duì)破骨胞分化和骨吸收的作用,并闡明其作用機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞,采用核因子κB受體活化因子配體(RANKL)和不同濃度GBE處理細(xì)胞,分為空白對(duì)照組(0μg·L~(-1) RANKL)、RANKL組(100μg·L~(-1) RANKL)和RANKL+75 mg·L~(-1) GBE和RANKL+150mg·L~(-1) GBE組�？咕剖崴嵝匀旧�(TRAP)法觀察各組破骨細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量,骨吸收陷窩面積評(píng)估GBE對(duì)破骨細(xì)胞骨吸收能力的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期,RT-PCR法檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞中破骨細(xì)胞相關(guān)基因活化T細(xì)胞核因子c1(NFATc1)、樹(shù)突狀細(xì)胞特異性跨膜蛋白(DCSTAMP)、組織蛋白酶K(Cathepsin K)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、B淋巴細(xì)胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、P27和細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)的表達(dá)水平。結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,RANKL組破骨細(xì)胞的數(shù)量明顯增加(P0.05);與RANKL組比較,RANKL+75mg·L~(-1) GBE和RANKL+150mg·L~(-1)GBE組破骨細(xì)胞數(shù)量明顯降低(P0.05)。與空白對(duì)照組比較,RANKL組骨片中骨吸收陷窩面積明顯升高(P0.05);與RANKL組比較,RANKL+75mg·L~(-1) GBE和RANKL+150mg·L~(-1) GBE組骨片中骨吸收陷窩面積明顯降低(P0.05)。與空白對(duì)照組比較,75和150 mg·L~(-1) GBE組RAW264.7細(xì)胞凋亡率升高(P0.05),RAW264.7細(xì)胞中Bcl-2基因表達(dá)水平明顯降低(P0.05),Bax基因表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。與RANKL組比較,RANKL+75 mg·L~(-1) GBE和RANKL+150 mg·L~(-1) GBE組RAW264.7細(xì)胞G0-G1期阻滯明顯縮短(P0.05);RAW264.7細(xì)胞中P27基因表達(dá)水平明顯降低(P0.05),Cyclin-D1基因表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。與空白對(duì)照組比較,RANKL組RAW264.7細(xì)胞中破骨細(xì)胞相關(guān)基因NFATc1、DC-STAMP、Cathepsin K和MMP-9表達(dá)水平明顯升高(P0.05);與RANKL組比較,RANKL+75mg·L~(-1) GBE和RANKL+150 mg·L~(-1) GBE組RAW264.7細(xì)胞中破骨細(xì)胞相關(guān)基因NFATc1、DCSTAMP、Cathepsin K和MMP-9表達(dá)水平明顯降低(P0.05)。結(jié)論:GBE可抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收能力,其機(jī)制可能與促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞凋亡、縮短RANKL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞的G0-G1期有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of different concentrations of Ginkgo biloba extract (GBE) on osteoclast differentiation and bone resorption and to elucidate its mechanism. Methods: RAW264.7 cells were cultured in vitro and treated with nuclear factor 魏 B receptor activating factor ligand (RANKL) and different concentrations of GBE. The cells were divided into blank control group (0 渭 g L ~ (-1) RANKL group (100 渭 g L ~ (-1) RANKL), RANKL 75 mg L ~ (-1) GBE group and RANKL 150mg L ~ (-1) GBE group. The morphology and number of osteoclasts in each group were observed by tartrate-resistant acid staining (trap) and the area of bone resorption lacunae was used to evaluate the effect of GBE on osteoclast bone resorption. Detection of apoptosis rate and cell cycle RT-PCR in RAW264.7 cells using flow cytometry to detect osteoclast-associated gene activated T cell nuclear factor C1 (NFATc1), dendritic cell-specific transmembrane protein (DCSTAMP), cathepsin K (cathepsin K) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) B The expression levels of Bcl-2 associated X protein (Bax) P27 and cyclin D1 (Cyclin-D1) in lymphocytoma 2 (Bcl-2). Results: compared with the blank control group, the number of osteoclasts in RANKL group was significantly increased (P0.05), and the number of osteoclasts in RANKL 75mg L-1 GBE and RANKL 150mg L-1 GBE groups was significantly lower than that in RANKL 75mg L-1 GBE group (P0.05). Compared with the blank control group, the area of bone resorption lacunae in RANKL 75mg L-1 GBE and RANKL 150mg L-1 GBE group was significantly higher than that in RANKL group (P0.05), and the bone resorption lacuna area in RANKL 75mg L-1 GBE group was significantly lower than that in RANKL 150mg L-1 GBE group (P0.05). Compared with the blank control group, the apoptosis rate of RAW264.7 cells in 75 and 150 mg / L GBE groups was increased (P0.05). The expression of Bcl-2 gene in RAW264.7 cells was significantly decreased (P0.05) and the expression level of Bax gene in RAW264.7 cells was significantly increased (P0.05). Compared with RANKL group (75 mg L ~ (-1) GBE) and RANKL 150 mg L ~ (-1) GBE group, the G0-G1 phase arrest of RAW264.7 cells was significantly shortened (P0.05) the expression level of P27 gene in RAW264.7 cells was significantly decreased (P0.05) and the expression level of Cyclin-D1 gene in RAW264.7 cells was significantly increased (P0.05). Compared with the control group, the expression of osteoclast associated gene NFATc1DC-STAMPP Cathepsin K and MMP-9 in RAW264.7 cells in RANKL group was significantly higher than that in RAW264.7 cell group (P0.05), and the expression levels of osteoclast associated genes NFATc1DCSTAMPP Cathepsin K and MMP-9 in RAW264.7 cells were significantly decreased in RAW264.7 cells compared with RANKL 75mg L-1 GBE and RANKL 150mg L-1 GBE group (P0.05). Conclusion the cell differentiation and bone resorption of RAW264.7 cells can be inhibited by 1: GBE, which may be related to the promotion of RAW264.7 cell apoptosis and the shortening of G0-G1 phase of RAW264.7 cells induced by RANKL.
【作者單位】： 吉林大學(xué)口腔醫(yī)院修復(fù)科;廣州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院修復(fù)科;
【基金】：廣東省教育廳科研項(xiàng)目資助課題(B16036078) 吉林省科技廳科研項(xiàng)目資助課題(20140204022SF) 廣州醫(yī)科大學(xué)青年科研項(xiàng)目資助課題(2015A32)
【分類號(hào)】：R78

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本文編號(hào)：2087839