本文選題：多能干細胞 + 細胞代次��； 參考：《北京大學學報(醫(yī)學版)》2017年01期

【摘要】：目的:研究不同代次誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)在增殖及向牙周定向分化能力上的區(qū)別,為今后深入研究和可能的臨床應用提供理論基礎。方法:復蘇不同代次(P5、P10、P15、P20)人牙齦成纖維細胞來源的i PSCs,觀察細胞形態(tài)并比較其增殖能力,進一步將各代次細胞形成擬胚體,于含生長分化因子-5(growth/differentiation factor-5,GDF-5)的培養(yǎng)基中誘導分化14 d,同時分別設置未誘導自發(fā)分化組為陰性對照,茜素紅染色觀察礦化結節(jié)并半定量分析鈣鹽沉積量,qRT-PCR及免疫熒光染色分別檢測牙周相關基因及蛋白的表達,評價各代次間分化能力的差異。結果:不同代次的i PSCs均具有很強的體外增殖能力,經牙周定向誘導的細胞呈成纖維細胞樣生長,茜素紅染色可形成"礦化"結節(jié),細胞鈣鹽沉積量較自發(fā)分化組顯著增高且差異有統(tǒng)計學意義(P5:t=2.125,P=0.003;P10:t=2.246,P=0.021;P15:t=3.754,P=0.004;P20:t=3.933,P=0.002),但相同誘導條件下不同代次間鈣鹽沉積量差異無統(tǒng)計學意義(牙周定向誘導組:F=2.365,P=0.109;自發(fā)分化對照組:F=2.901,P=0.067),此外,相同代次細胞中誘導組牙周相關標記物的表達均高于對照組且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但不同代次間的蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(骨涎蛋白:F=0.9267,P=0.450;波形蛋白:F=0.9171,P=0.455;牙骨質蛋白1:F=2.129,P=0.137)。結論:不同代次不會影響i PSCs的增殖及分化能力,體外長期培養(yǎng)的i PSCs易于擴增,較高代次者經誘導仍可高效定向分化,適合作為牙周組織工程的種子細胞。
[Abstract]:Objective: to study the difference of proliferation and periodontal directional differentiation between different generations of induced pluripotent stem cells in order to provide a theoretical basis for further research and possible clinical application. Methods: I PSCs derived from human gingival fibroblasts were resuscitated from different generations of P5, P10, P15 and P20. The morphology of the cells was observed and their proliferative abilities were compared. The differentiation was induced in the medium containing growth factor -5 (GDF-5) for 14 days, and the group without spontaneous differentiation was set as negative control. Alizarin red staining was used to observe the mineralized nodules and semi-quantitative analysis of calcium salt deposition. The expression of periodontal related genes and proteins were detected by RT-PCR and immunofluorescence staining respectively, and the differentiation ability of different generations was evaluated. Results: I PSCs of different generations had strong proliferative ability in vitro. The cells induced by periodontal orientation grew like fibroblasts, and alizarin red staining could form "mineralized" nodules. Cell calcium deposition was significantly higher than that of spontaneous differentiation group (P 5: t 2. 125% P0. 003) P10t1 2. 246U P0. 021 + P15: t 3. 754 + P0. 004 + P20: t 3. 933 P0. 002, but there was no significant difference in calcium deposition between different generations under the same inducement condition (periodontal orientation induction group: F 2. 365U P0. 109; spontaneous control group: F 2. 901P 0.067, P 0. 067), but under the same inducement condition, there was no significant difference in the amount of calcium deposit between different generations (P = 2. 365P0. 109); the spontaneous control group: F2. 901P0. 067, in addition, there was no significant difference in the amount of calcium deposition between different generations under the same inducement. In the same generation, the expression of periodontal markers in the induction group was higher than that in the control group, and the difference was statistically significant (P 0.05), but there was no significant difference in protein expression among different generations (bone sialoprotein: F0. 9267 P0. 450; vimentin 1: F0. 9171, P0. 455; cementum protein: 1: F2. 129, P0. 137). Conclusion: the ability of proliferation and differentiation of I PSCs is not affected by different generations. The long term cultured I PSCs are easy to expand, and the higher generation can still be induced to differentiate effectively, which is suitable for periodontal tissue engineering seed cells.
【作者單位】： 北京大學口腔醫(yī)學院·口腔醫(yī)院牙周科口腔數字化醫(yī)療技術和材料國家工程實驗室口腔數字醫(yī)學北京市重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(81470739)資助~~
【分類號】：R781

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4 杜U，

本文編號：2007135