本文選題：白介素-17 + 人牙周膜成纖維細(xì)胞　； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:牙根吸收是正畸治療過程中常見的并發(fā)癥,而IL-17和牙周膜成纖維細(xì)胞可能通過誘導(dǎo)牙周膜微環(huán)境中的破骨細(xì)胞前體生成具有骨吸收功能的破骨細(xì)胞從而引發(fā)牙根吸收。本實驗擬探討IL-17作用的牙周膜成纖維細(xì)胞和RANKL對人外周血單核細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,檢測不同濃度IL-17刺激下的牙周膜成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液和RANKL不同時間作用下,PBMC中CTSK、MMP-9和CAⅡmRNA表達(dá)的影響,以及共培養(yǎng)體系下,觀察破骨樣細(xì)胞的形態(tài)與特征標(biāo)記物,探討IL-17和牙周膜成纖維細(xì)胞在正畸牙根吸收中可能的作用及其作用機制。方法:1.采用密度梯度離心法法培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞,接種于48孔板,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長狀態(tài),采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)牙周膜組織,建立HPDLF和PBMC間接共培養(yǎng)體系;2.取第4-6代生長良好的HPDLF,分別加入己經(jīng)配制的含IL-17濃度為0或20ng/ml的DMEM培養(yǎng)基作用42h,換用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基作用12小時,收集HPDLF細(xì)胞上清液,加入50ng/ml的RANKL,作為條件培養(yǎng)液;3.以不同HPDLF條件培養(yǎng)液分別作用于PBMC 3天,5天,7天,10天,采用RT-qPCR法檢測外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)生成破骨樣細(xì)胞CTSK、MMP-9、CAⅡImRNA的表達(dá)水平;4.不同條件培養(yǎng)液作用于外周血單核細(xì)胞后,間接共培養(yǎng)誘導(dǎo)破骨樣細(xì)胞生成14d,鬼筆環(huán)肽染色觀察和計數(shù)破骨樣細(xì)胞的細(xì)胞骨架中纖維肌動蛋白環(huán)的形態(tài)、數(shù)目。結(jié)果:1.所培養(yǎng)外周血單核細(xì)胞為圓形,疏松貼壁生長,作為破骨細(xì)胞前體細(xì)胞。牙周膜成纖維細(xì)胞為長梭形,呈放射狀或漩渦狀生長,生長狀態(tài)穩(wěn)定。2.經(jīng)RT-qPCR檢測,在共培養(yǎng)體系下,與對照組相比,IL-17(+)條件培養(yǎng)液和RANKL作用于PBMC后,可上調(diào)CTSK、MMP-9、CAⅡmRNA的表達(dá),其中,以IL-17(+)、RANKL(+)組和10d組的表達(dá)變化量最明顯,組間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.在共培養(yǎng)體系下,單核細(xì)胞能生成具有纖維肌動蛋白環(huán)形態(tài)的破骨樣細(xì)胞,IL-17(+)組和RANKL(+)組與IL-17(-)、RANKL(-)組的具有纖維肌動蛋白環(huán)形態(tài)的破骨樣細(xì)胞數(shù)目相比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.采用密度梯度離心法和組織塊培養(yǎng)法,成功地建立了破骨細(xì)胞前體(PBMC)和人牙周膜成纖維細(xì)胞(HPDLF)共培養(yǎng)體系,,生物學(xué)性狀穩(wěn)定;適宜濃度的IL-17(+)條件培養(yǎng)液和RANKL能誘導(dǎo)PBMC生成表達(dá)CTSK、MMP-9、CAⅡmRNA的破骨樣細(xì)胞。2.IL-17作用的牙周膜成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液和RANKL能促進(jìn)PBMC對CTSK、MMP-9、CAⅡmRNA的表達(dá)。3.在與人牙周膜成纖維細(xì)胞直接共培養(yǎng)的前提下,人外周血單個核細(xì)胞可分化為具有纖維肌動蛋白環(huán)形態(tài)的破骨樣細(xì)胞。4.IL-17和人牙周膜成纖維細(xì)胞在體外能夠誘導(dǎo)破骨細(xì)胞前體生成破骨樣細(xì)胞,可能的機制是通過牙周膜微環(huán)境中的人牙周膜成纖維細(xì)胞表達(dá)RANKL介導(dǎo)破骨細(xì)胞分化與成熟。
[Abstract]:Objective: root resorption is a common complication in orthodontic treatment. IL-17 and periodontal ligament fibroblasts may induce osteoclast precursors in periodontal ligament microenvironment to produce osteoclasts with bone resorption function, which may lead to root resorption. The purpose of this study was to investigate the effects of IL-17 on the biological behavior of human peripheral blood monocytes and periodontal ligament fibroblasts and RANKL. The expression of CTSK-MMP-9 and CA 鈪，

本文編號：1909249