本文選題：BMP- + 地塞米松��； 參考：《中國修復重建外科雜志》2017年06期

【摘要】：目的通過將BMP-2和地塞米松分別及聯(lián)合作用于體外培養(yǎng)的人牙髓細胞,探討兩者對牙髓細胞增殖和分化能力的影響。方法取25歲以下患者因正畸原因拔出的無病變牙牙髓組織,采用組織塊法體外培養(yǎng)人牙髓細胞并傳至第3代,行波形蛋白和角蛋白免疫細胞化學染色鑒定。取生長狀況良好的第3~5代牙髓細胞分為4組,A、B、C組分別加入100 ng/m L BMP-2、1×10 8 mol/L地塞米松、100 ng/m L BMP-2以及1×10 8 mol/L地塞米松,D組不添加誘導劑作為對照組。培養(yǎng)1、3、5、7 d繪制細胞生長曲線;培養(yǎng)5、7 d行RT-PCR檢測成牙本質(zhì)細胞形成標記基因表達情況,包括牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentin sialophoshoprotein,DSPP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP-1)、ALP;培養(yǎng)14 d行ALP染色并計算陽性染色面積占總面積比值;培養(yǎng)21 d行茜素紅染色并測定562 nm波長處吸光度(A)值。結果成功分離培養(yǎng)呈長梭形的人牙髓細胞,經(jīng)波形蛋白和角蛋白免疫細胞化學染色鑒定顯示符合牙髓細胞的生物學特征。隨培養(yǎng)時間延長,各組細胞均逐漸增加,5 d時達峰值,7 d時降至3 d水平。培養(yǎng)5 d,A、B、C組細胞顯著多于D組,C組多于A組,A組多于B組,比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RT-PCR檢測示,培養(yǎng)5 d,A、B、C組ALP、DSPP、DMP-1 m RNA相對表達量均顯著高于D組,C組顯著高于A、B組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);A、B組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。培養(yǎng)7 d,除A、B、C組DSPP m RNA相對表達量顯著高于D組(P0.05)外,其余各組間各基因相對表達量比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。培養(yǎng)14 d ALP染色示,各組可見紫黑色沉淀,其中C組著色程度最深;經(jīng)半定量測定,C組陽性染色面積占總面積比值顯著高于A、B、D組,A、B組高于D組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);A、B組間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。培養(yǎng)21 d茜素紅染色示,C組礦化結節(jié)呈片狀大面積分布,A、B組呈散在分布,D組無礦化結節(jié)形成;各組間A值比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論 BMP-2對牙髓細胞的增殖作用比地塞米松更明顯,兩者對牙髓細胞分化作用差異不明顯;但與單獨應用相比,兩者聯(lián)合應用對牙髓細胞的增殖和分化有明顯促進作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of BMP-2 and dexamethasone on the proliferation and differentiation of human dental pulp cells in vitro. Methods Human dental pulp cells were cultured in vitro by tissue mass method and passed to the third passage, and identified by vimentin and keratin immunocytochemistry. The third generation of dental pulp cells in good growth condition were divided into 4 groups: group C was treated with 100 ng/m L BMP-2O 1 脳 10 8 mol/L dexamethasone 100 ng/m L BMP-2 and group D with 1 脳 10 8 mol/L dexamethasone as control group. The cell growth curve was drawn on the 7th day of culture and the expression of odontoblast marker gene was detected by RT-PCR on the 5th day of culture. It included dentin sialophosho protein DSPP, dentin matrix protein 1(dentin matrix protein 1, DMP-1 and ALP, ALP staining for 14 days and the ratio of positive staining area to total area, and alizarin red staining for 21 days and absorbance at 562 nm. Results Human dental pulp cells were isolated and cultured successfully and identified by vimentin and keratin immunocytochemical staining. The results showed that these cells accord with the biological characteristics of dental pulp cells. With the increase of culture time, the cells of each group increased gradually and reached the peak value at 5 d and decreased to 3 d level at 7 d. After 5 days of culture, the number of cells in group C was significantly more than that in group C and group A was more than that in group A and group B, and the difference was statistically significant (P 0.05). RT-PCR analysis showed that the relative expression of RNA RNA of ALP DSPPmDMP-1 in group C was significantly higher than that in group C (group D) and that in group A (group A) was significantly higher than that in group A (P < 0.05), and the expression of DMP-1 RNA in group B was significantly higher than that in group C (P < 0.05). All the differences were statistically significant. There was no significant difference between group A and group B (P 0.05). After 7 days of culture, the relative expression of DSPP m RNA was significantly higher in group A than that in group D (P 0.05). On the 14th day of culture, ALP staining showed that there was purple black precipitate in each group, among which group C was the most stained, and the ratio of positive staining area to total area in group C was significantly higher than that in group A and B was significantly higher than that in group D by semi-quantitative measurement, and that in group C was higher than that in group D. All the differences were statistically significant. There was no significant difference between group A and group B (P 0.05, P 0.05, P 0. 05, P 0. 05, P 0. 05, P 0. 05). 21 days after culture, alizarin red staining showed that the mineralized nodules in group C were in the form of flaky large areas, and that in group A, there were no mineralized nodules in group D, and there were significant differences in A values among the groups (P 0.05). Conclusion the effect of BMP-2 on the proliferation of dental pulp cells is more obvious than that of dexamethasone, and there is no significant difference between the two groups in the differentiation of dental pulp cells, but the combined use of BMP-2 and dexamethasone can obviously promote the proliferation and differentiation of dental pulp cells.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學;廣西醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院兒童牙病科;
【分類號】：R781

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1842608