發(fā)布時間：2018-04-23 05:04

  本文選題：修復性牙本質 + 牙髓細胞�。� 參考：《武漢大學》2014年博士論文

【摘要】：牙齒在受到外界嚴重的損傷刺激后,牙髓腔周圍的成牙本質細胞死亡,牙髓細胞中的干細胞/祖細胞就會遷移到損傷部位,分化形成成牙本質細胞樣細胞,并分泌細胞基質,形成修復性牙本質。目前,牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化的機制不是很清楚。 很多研究表明,P-catenin在牙齒的發(fā)育過程中起至關重要的作用。例如間充質特異性敲除P-catenin使發(fā)育中的牙胚停滯于蕾狀期。并且有不少研究表明,牙齒發(fā)育和牙齒的修復再生存在許多共同調控機制。然而P-catenin在牙齒修復再生過程中的作用不清楚。有研究表明,在間充質干細胞的成骨,成軟骨,成脂肪分化過程中,p-catenin起重要作用。因此,P-catenin很可能調控修復性牙本質形成過程中牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化。 P-catenin能夠進入細胞核與多種輔助因子(co-factors)共同啟動靶基因的表達。其在不同的生物學過程中通過調控不同的靶基因產生不同的生物學效應。不少研究表明,Runx2是成牙分化和成骨分化中重要的轉錄因子,它能啟動成牙/成骨相關標志基因的轉錄。從而調控成牙和成骨方向分化。研究表明,Runx2能正向調控DSPP基因的轉錄,從而促進成牙分化。值得注意的是,Gaur et al.(2005)在小鼠MC3T3細胞系成骨分化的研究中報道β-catenin能夠結合Runx2的啟動子區(qū)并且啟動Runx2的表達。因此,我們推測β-catenin在牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化中的作用很可能是通過調控Runx2。 本研究重點探討：①β-catenin在大鼠修復性牙本質形成過程中的表達規(guī)律。②β-catenin在人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中的作用。③β-catenin是否通過Runx2促進牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化。 第一部分P-catenin在大鼠修復性牙本質形成過程中的表達規(guī)律研究 目的：觀察P-catenin在修復性牙本質形成過程中的表達分布,初步探討P-catenin是否參與修復性牙本質形成過程。 方法：采用24只Wistar雄性大鼠,對其上頜第一磨牙進行MTA直接蓋髓術,分別在0天、7天和14天處死大鼠,分離上頜骨,制作組織切片,HE染色觀察修復性牙本質形成過程,免疫組織化學染色分析P-catenin在修復性牙本質形成過程中的表達規(guī)律。 結果：直接蓋髓術后的第7天,修復性牙本質形成于穿髓孔下方,β-catenin強表達于修復性牙本質形成過程中穿髓孔下方的牙髓細胞和成牙本質細胞樣細胞,特別是圍繞在修復性牙本質周圍的牙本質細胞樣細胞,β-catenin呈強表達,并且胞核著色較深。第14天,穿髓孔下方形成的修復性牙本質橋將穿髓孔完全封閉。β-catenin的表達方式與術后7天基本一致,強表達在修復性牙本質形成過程中穿髓孔下方的牙髓細胞和成牙本質細胞樣細胞,并且胞核著色較深。 結論：β-catenin參與修復性牙本質的形成過程,并且可能在牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中起作用。 第二部分β-catenin在人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中作用的研究 目的：觀察人牙髓細胞向成牙本質細胞分化過程中β-catenin的表達規(guī)律,并且進一步觀察β-catenin抑制表達和β-catenin胞內積聚對人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化的影響,探討β-catenin在人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中的作用。 方法：利用β-磷酸甘油鈉、地塞米松和抗壞血酸誘導人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化,通過茜素紅染色,堿性磷酸酶活性及成牙本質細胞分化相關基因的表達鑒定人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化模型。通過Q-PCR和Western blot檢測β-catenin在人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程的表達規(guī)律。采用慢病毒介導的shRNA抑制β-catenin的表達和LiC1來促進β-catenin的胞內積聚,觀察抑制β-catenin的表達和促進β-catenin的胞內積聚后,礦化結節(jié)形成的改變及成牙本質細胞分化相關基因表達的改變。 結果：在誘導人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中,礦化結節(jié)形成,堿性磷酸酶的活性水平逐漸升高,成牙本質細胞分化相關基因DSPP,DMP-1,BSP,OCN的表達顯著上調。在人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中,β-catenin的基因及蛋白水平的表達都呈逐漸升高趨勢。慢病毒抑制β-catenin的表達后,礦化結節(jié)形成減少,成牙本質細胞分化相關基因的表達下降。LiC1促進β-catenin的胞內積聚后,礦化結節(jié)形成增加,成牙本質細胞分化相關基因的表達升高。 結論：β-catenin能夠促進人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化。 第三部分P-catenin通過Runx2促進牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化 目的：探討β-catenin在牙髓細胞向成牙本質細胞分化過程中的作用機制,確定β-catenin是否通過調控Runx2的表達來調控牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化,并確定該機制是否也參與修復性牙本質形成過程中牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程。 方法：通過免疫組化檢測Runx2在修復性牙本質形成過程中的表達規(guī)律及β-catenin與Runx2在修復性牙本質形成過程中的定位關系。通過Q-PCR和Western blot檢測人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中Runx2的動態(tài)表達規(guī)律。觀察抑制β-catenin的表達或者促進β-catenin的胞內積聚后,Runx2的表達情況。通過ChIP實驗檢測隨著牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中,β-catenin對Runx2的啟動子區(qū)結合率的改變。并且檢測抑制β-catenin的表達和促進β-catenin的胞內積聚對該結合率的影響。 結果：在修復性牙本質形成過程中,Runx2的表達與β-catenin的表達模式基本一致,并且Runx2和β-catenin共表達在修復性牙本質形成過程中牙本質細胞樣細胞和穿髓孔下方的牙髓細胞。在人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中,Runx2的表達升高。抑制β-catenin的表達,Runx2的表達受到抑制。相反,β-catenin的胞內積聚能夠促進Runx2的表達。免疫共沉淀的結果顯示,人牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化過程中,β-catenin對Runx2啟動子區(qū)的結合率增高。抑制β-catenin的表達,β-catenin對Runx2啟動子區(qū)的結合率降低。相反,β-catenin的胞內積聚增加了β-catenin對Runx2啟動子區(qū)的結合率。 結論：β-catenin能夠通過啟動Runx2的表達促進牙髓細胞向成牙本質細胞方向分化。該機制可能在修復性牙本質形成過程中起作用。
[Abstract]:After being stimulated by external serious injury , the odontoblasts surrounding the pulpitis die , and the stem cells / progenitor cells in the dental pulp cells migrate to the injured site , differentiate into odontoblast - like cells and secrete the cell matrix to form the restorative dentin .

Many studies have shown that P - catenin plays an important role in the development of teeth . For example , P - catenin plays an important role in the development of teeth .

The study shows that Runx2 can regulate the transcription of DSPP gene by regulating the transcription of DSPP gene . The results show that Runx2 can regulate the transcription of DSPP gene and activate the expression of Runx2 .

This study focused on the expression of 尾 - catenin in the formation of rat dental pulp . 鈶，

本文編號：1790552