人DLL1真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及過(guò)表達(dá)DLL1抑制人口腔鱗癌細(xì)胞SCC15的增殖
本文選題:Notch信號(hào)通路 切入點(diǎn):人DLL 出處:《暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版)》2017年03期
【摘要】:目的:構(gòu)建人全長(zhǎng)DLL1基因真核表達(dá)質(zhì)粒及過(guò)表達(dá)DLL1對(duì)人口腔鱗癌細(xì)胞增殖的影響.方法:PCR擴(kuò)增人全長(zhǎng)DLL1基因,酶切和測(cè)序鑒定后克隆至真核表達(dá)載體pCMV-Tag4并構(gòu)建真核重組質(zhì)粒DLL1/pC MVTag4,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)和Western blot鑒定DLL1的表達(dá);進(jìn)一步檢測(cè)DLL1在SCC15等3株人口腔鱗癌細(xì)胞中的表達(dá);DLL1/pCMV-Tag4瞬時(shí)轉(zhuǎn)染SCC15細(xì)胞,Q-PCR和Western blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)及MTT檢測(cè)DLL1過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞SCC15增殖的影響.結(jié)果:真核重組質(zhì)粒DLL1/pCMV-Tag4在HEK293T細(xì)胞中成功表達(dá);DLL1在口腔鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)高于正?谇患(xì)胞;DLL1/pCMV-Tag4在SCC15細(xì)胞中獲得表達(dá)且過(guò)表達(dá)DLL1抑制SCC15細(xì)胞的增殖.結(jié)論:人全長(zhǎng)DLL1分子在HEK293T及SCC15細(xì)胞中獲得表達(dá),過(guò)表達(dá)DLL1抑制口腔鱗癌細(xì)胞SCC15的增殖.
[Abstract]:Aim: to construct the eukaryotic expression plasmid of human full-length DLL1 gene and the effect of overexpression of DLL1 on the proliferation of human oral squamous cell carcinoma cells.Methods the full-length human DLL1 gene was amplified by 1: PCR and cloned into eukaryotic expression vector pCMV-Tag4 after restriction endonuclease digestion and sequencing. The eukaryotic recombinant plasmid DLL1/pC MV Tag4 was constructed. The recombinant plasmid DLL1/pC MV Tag4 was transiently transfected into HEK293T cells. The expression of DLL1 was identified by real-time fluorescence quantitative PCR PCR Q-PCR and Western blot.The expression of DLL1 in three human oral squamous cell carcinoma (SCC15) cells was further detected by Q-PCR, Western blot and DLL1 overexpression in SCC15 cells transfected with DLL1 / pCMV-Tag4 and the effect of MTT on SCC15 proliferation.Results: the expression of DLL1 in HEK293T cells was higher than that in normal oral squamous cell carcinoma cells (DL1 / pCMV-Tag4), and the overexpression of DLL1 inhibited the proliferation of SCC15 cells.Conclusion: human full-length DLL1 was expressed in HEK293T and SCC15 cells, and overexpression of DLL1 inhibited the proliferation of SCC15 in oral squamous carcinoma cells.
【作者單位】: 南方醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)與生物技術(shù)學(xué)院生物治療研究所;珠海南醫(yī)大生物醫(yī)藥公共服務(wù)平臺(tái)有限公司;
【基金】:國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展技術(shù)(863計(jì)劃)項(xiàng)目(2014AA020909) 國(guó)家自然科學(xué)基金-廣東省聯(lián)合基金重點(diǎn)項(xiàng)目(U1401223) 國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81470831) 廣東省科技計(jì)劃創(chuàng)新載體建設(shè)項(xiàng)目(2013B090800036);廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015A040404021;2016B090919019)
【分類號(hào)】:R739.8
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,本文編號(hào):1729259
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