發(fā)布時(shí)間：2018-04-02 15:36

  本文選題：STAT3　切入點(diǎn)：IGF-I　出處：《山東大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 探索體外胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)促進(jìn)L6成肌細(xì)胞增殖的適宜濃度,探討信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)在IGF-Ⅰ介導(dǎo)的L6成肌細(xì)胞增殖中的作用。方法： 使用10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,200ng/ml,300ng/ml的IGF-Ⅰ作用于L6成肌細(xì)胞,2%FBS培養(yǎng)基作為對(duì)照組,分別作用0h、12h、24h、48h, MTT法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞增殖活性；利用100ng/ml的IGF-Ⅰ作用于L6成肌細(xì)胞0h、12h、24h、48h,2%FBS培養(yǎng)基作為對(duì)照組,提取各組細(xì)胞的總RNA和總蛋白,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)及Western-Blotting免疫印跡技術(shù)檢測(cè)STAT3蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平的變化情況及磷酸化STAT3蛋白P-STAT3的表達(dá)情況；利用JAK-STAT3通路抑制劑AG490預(yù)處理細(xì)胞后,再利用100ng/ml的IGF-I作用于L6成肌細(xì)胞24h,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)及Western-Blotting免疫印跡技術(shù)檢測(cè)STAT3蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平的變化情況及磷酸化STAT3蛋白的表達(dá)變化,MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖活性的變化。 結(jié)果： (1)當(dāng)IGF-I濃度小于100ng/ml時(shí),隨著IGF-I濃度的升高,各時(shí)間段內(nèi)成肌細(xì)胞增殖能力均逐漸增強(qiáng),變化有顯著性差異(P0.05)；當(dāng)IGF-I濃度大于100ng/ml時(shí),細(xì)胞增殖能力隨IGF-Ⅰ濃度上升增強(qiáng)不明顯,變化無顯著性差異(P0.05)。(2)在0-24h時(shí)間段內(nèi),成肌細(xì)胞在IGF-Ⅰ作用下增殖能力逐漸增強(qiáng),24h時(shí)達(dá)到高峰,變化有顯著性差異(P0.05)。24h后,IGF-Ⅰ濃度低于100ng/ml的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力下降,變化有顯著性差異(P0.05); IGF-Ⅰ濃度高于100ng/ml的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖速度變緩,但仍維持在較高水平,變化有顯著性差異(P0.05)。(3)經(jīng)100ng/ml IGF-ⅠI誘導(dǎo)組細(xì)胞的STAT3蛋白無論基因轉(zhuǎn)錄水平還是蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組,有顯著性差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞各時(shí)間段之間STAT3,總蛋白表達(dá)水平無明顯差異(P0.05), p-STAT3蛋白表達(dá)水平在0～24h內(nèi)逐漸升高,在24h達(dá)到高峰,變化有顯著性差異(P0.05),其后表達(dá)水平下降,有顯著性差異(P0.05)。(4)AG490處理組細(xì)胞增殖活性明顯低于未處理組,有顯著性差異(P0.05)。經(jīng)AG490預(yù)處理組細(xì)胞STAT3總蛋白表達(dá)水平與未處理組細(xì)胞無明顯差異(P0.05), p-STAT3表達(dá)明顯低于未經(jīng)AG490處理組細(xì)胞,有顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論： 一定濃度的IGF-Ⅰ對(duì)成肌細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用,在IGF-Ⅰ介導(dǎo)的成肌細(xì)胞增殖過程中,STAT3蛋白被激活,部分阻斷細(xì)胞STAT3蛋白磷酸化后,細(xì)胞增殖能力顯著下降,我們由此可推斷STAT3蛋白在IGF-Ⅰ介導(dǎo)的成肌細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮著重要作用。
[Abstract]:Objective:To explore the appropriate concentration of insulin-like growth factor 鈪，

本文編號(hào)：1701063