本文關(guān)鍵詞：機(jī)械牽張應(yīng)力影響人牙周膜干細(xì)胞TAZ表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的明確機(jī)械張應(yīng)力對(duì)人牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及張應(yīng)力作用下TAZ的表達(dá)變化。方法1.人牙周膜干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定將原代培養(yǎng)的牙周膜細(xì)胞制備單細(xì)胞懸液有限稀釋原克隆化培養(yǎng),分離得到PDLSCs,傳代后的第3代PDLSC用于本實(shí)驗(yàn)研究,免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞表面分子STRO-1、CD146,流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞表面標(biāo)志物CD14、CD29、CD44、 CD45、CD90,并進(jìn)行成骨、成脂誘導(dǎo),對(duì)分離培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。2.機(jī)械張應(yīng)力對(duì)人牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響本實(shí)驗(yàn)采用Forcel四點(diǎn)彎曲細(xì)胞力學(xué)加載儀進(jìn)行機(jī)械張應(yīng)力加載,取第3代PDLSCs接種于加力板,爬片處理,實(shí)驗(yàn)組設(shè)置應(yīng)變量3000μstrain,頻率0.5HZ,加載時(shí)間段分別為30、60、180、360、720min,對(duì)照組不加力。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期,以觀察機(jī)械張應(yīng)力作用后的不同時(shí)間段內(nèi)PDLSCs增殖能力的變化；通過(guò)人牙周膜干細(xì)胞ALP酶活性的檢測(cè)以及通過(guò)實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR)檢測(cè)PDLSCs成骨相關(guān)基因RUNX2 mRNA的表達(dá),觀察機(jī)械張應(yīng)力作用對(duì)PDLSCs成骨分化能力的影響,通過(guò)PCR檢測(cè)成脂基因PPARy mRNA的表達(dá),觀察機(jī)械張應(yīng)力作用對(duì)PDLSCs成脂分化能力的影響。3.機(jī)械張應(yīng)力對(duì)轉(zhuǎn)錄激活因子TAZ表達(dá)的影響收集加力30、60、180、360、720min后的細(xì)胞,觀察TAZ的變化情況。結(jié)果1.人牙周膜干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定有限稀釋克隆化培養(yǎng)的PDLSCs,形態(tài)相似,均為梭形、不規(guī)則型,細(xì)胞為放射狀或者旋渦狀排列；免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面分子顯示所得細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物STRO-1、CD146、CD29、CD44、 CD90,陰性表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物CD14、CD45。成骨誘導(dǎo)可見礦化結(jié)節(jié)形成,茜素紅染色顯示陽(yáng)性結(jié)果；成脂誘導(dǎo)后可見細(xì)胞中脂滴形成。2.機(jī)械張應(yīng)力作用下人牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)特性的變化使用Forcel四點(diǎn)彎曲細(xì)胞力學(xué)加載儀進(jìn)行機(jī)械張應(yīng)力加載后,發(fā)現(xiàn)機(jī)械張應(yīng)力加載180min和360min時(shí),對(duì)PDLSCs增殖的促進(jìn)作用最明顯；PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因ALP、RUNX2,成脂相關(guān)基因PP ARy mRNA的表達(dá),發(fā)現(xiàn)機(jī)械張應(yīng)力加載60min后開始增加,并且隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增高,加力后180min,增加的幅度最大,此后增加幅度逐漸減弱。3.機(jī)械張應(yīng)力作用下TAZ的變化收集加力后特定時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)應(yīng)力加載60min后,TAZ的表達(dá)開始增加,在隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng)而增高。結(jié)論1.有限稀釋法克隆化培養(yǎng)的PDLSCs具有干細(xì)胞自我更新及多向分化潛能。2.3000μstrain的機(jī)械張應(yīng)力能夠促進(jìn)PDLSCs的增殖和多向分化能力,其促PDLSCs增殖分化能力的強(qiáng)弱與應(yīng)力加載的時(shí)間相關(guān),其中180min時(shí)促增殖分化效果最顯著。3.3000μstrain的機(jī)械張應(yīng)力能夠增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄共激活子TAZ的表達(dá),表明TAZ參與機(jī)械張應(yīng)力胞內(nèi)力學(xué)信號(hào)的傳遞,影響牙周膜干細(xì)胞的分化。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R783.5

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本文編號(hào)：1348930