本文關鍵詞：變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關dnaK操縱子結構基因突變的檢測　出處：《吉林大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的： 基因組學(genomics)是在分子生物學技術、電子計算機技術和信息網(wǎng)絡技術等研究手段的輔助下，研究生物體內所有基因，在整體水平上探索生命活動的內在規(guī)律及其內外環(huán)境影響機制的科學。它對所有基因進行基因組作圖、核苷酸序列分析、基因定位和功能分析�；蚪M學對口腔醫(yī)學發(fā)展的推動作用主要體現(xiàn)在對口腔致病微生物的基因組學研究[1]。 齲病是以細菌為主的多因素作用下，導致牙無機物脫礦、有機物分解的牙體硬組織慢性進行性破壞的一種疾病，也是口腔常見疾病之一，并被世界衛(wèi)生組織列為危害人類的三大疾病之一。齲病也被稱為牙體硬組織的細菌感染性疾病，而變形鏈球菌是致齲能力最強的齲病致病菌[2-4]。變形鏈球菌的致齲性主要取決于其產(chǎn)酸性和耐酸性[5]。目前氟化物廣泛應用于臨床防齲治療，而長期大量使用氟化物防齲可能會出現(xiàn)耐氟菌株。而研究證實變形鏈球菌耐氟菌株比親代菌株有更強的致齲能力。目前學者僅限于對變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關基因ffh、dfp、dltC、dnaK[6-8]等進行了基因突變檢測，而對于耐酸相關操縱子的突變情況還不清楚，仍需進一步研究。目前變形鏈球菌（UA159）全基因組及變形鏈球菌耐氟菌株（UA159-FR）全基因組測序已經(jīng)完成，可直接從網(wǎng)上獲得，，其GenBank登錄號AE014133[9]，CP007016[10]。本實驗組已經(jīng)成功在體外誘導出變形鏈球菌耐氟菌株[11]。變形鏈球菌dnaK操縱子由hrcA-grpE-dnaK-dnaJ組成。本實驗在分子水平上對耐氟菌株耐酸相關操縱子dnaK操縱子進行結構基因突變檢測，應用PCR直接測序技術[12]，確定dnaK操縱子結構基因是否發(fā)生突變。本實驗為更進一步了解變形鏈球菌耐氟菌株的致齲毒力機制打下基礎。這也為今后臨床更合理的應用氟化物防齲，以及應用分子生物學方法對致齲菌進行基因重組，改變遺傳性狀奠定了理論及實驗基礎。 方法： 1.體外誘導變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR，變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR的篩選與鑒定。 2.變形鏈球菌耐氟菌株基因組的提取。 3.根據(jù)GenBank發(fā)表的變形鏈球菌dnaK操縱子結構基因序列，及引物設計的原則，設計、合成引物。以變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR基因為模板進行PCR反應，獲取擴增的目的基因片段。利用PCR產(chǎn)物純化試劑盒回收純化PCR產(chǎn)物，交由生化公司進行測序。 4.應用NCBI BLAST核酸序列比對工具，將變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR的dnaK操縱子測序結果與親代菌株變形鏈球菌UA159的dnaK操縱子結構基因序列進行比對。 結果： 1.實驗培養(yǎng)的細菌鑒定為變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR。 2.完成了變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR dnaK操縱子結構基因的測序。 3.將變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR dnaK操縱子的結構基因與變形鏈球菌UA159通過blast比對，發(fā)現(xiàn)dnaK操縱子的結構基因序列改變。hrcA-grpE基因片段突變位點為943（T缺失），dnaK-dnaJ基因片段突變位點為2128（A插入），2298（C缺失）。 結論： 成功完成了變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR dnaK操縱子基因測序，發(fā)現(xiàn)dnaK操縱子的結構基因序列發(fā)生突變，證實變形鏈球菌耐氟菌株的耐酸性增強與dnaK操縱子結構基因的改變有關，hrcA-grpE基因片段突變位點為943（T缺失），dnaK-dnaJ基因片段突變位點為2128（A插入），2298（C缺失）。為進一步研究變形鏈球菌耐氟菌株致齲毒力奠定理論基礎。同時推測變形鏈球菌耐氟菌株致齲性增強可能還與操縱子的耐酸調控機制以及操縱子與突變基因之間的轉錄調控作用有一定關系。這為今后臨床更合理的應用氟化物防齲，以及齲病預防藥物的研發(fā)提供一定的理論及實驗基礎。
[Abstract]:Objective:
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R780.2

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1 戴瑩;變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關dnaK操縱子結構基因突變的檢測[D];吉林大學;2015年

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