本文關(guān)鍵詞：氧化鋯及純鈦表面處理對成骨細(xì)胞早期黏附、增殖的影響　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:自上世紀(jì)60年代骨整合理論成為現(xiàn)代口腔種植學(xué)的理論基礎(chǔ)以來,種植修復(fù)已在臨床上獲得了廣泛應(yīng)用。純鈦因其優(yōu)良的機(jī)械性能及生物相容性作為口腔種植植入材料在臨床應(yīng)用多年。通過對純鈦種植體表面進(jìn)行不同處理可以提高種植體表面的生物學(xué)性能,促進(jìn)種植體植入后成骨細(xì)胞在種植體表面的黏附,加速骨整合[1-9]。但其金屬特性使其于齦緣薄弱處可透出金屬顏色、或因金屬離子析出造成牙齦著色等而影響美觀。近年來,氧化鋯以其強(qiáng)度高、硬度大、耐腐蝕、生物相容性好、無金屬離子析出、與天然牙顏色相近等特點(diǎn),使其有可能成為新型口腔種植植入材料,并逐漸成為研究熱點(diǎn)。本研究采用氧化鋯及純鈦兩種材料,對材料表面進(jìn)行噴砂-雙酸洗處理,通過掃描電鏡觀察材料表面形貌,采用能譜分析進(jìn)行材料表面元素分析;通過成骨細(xì)胞接種培養(yǎng),采用掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡、MTT法觀察不同表面形貌的材料表面對成骨細(xì)胞早期粘附、增殖的影響,為氧化鋯做為口腔種植植入材料的進(jìn)一步應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1氧化鋯片、純鈦片制備制備30片直徑為19mm,厚度為1.0mm的氧化鋯片;制備30片直徑為19mm、厚度為1.0mm的Ta2純鈦片。2實(shí)驗(yàn)分組按照表面不同處理方法分為以下四組:A組:粗糙氧化鋯組,Al2O_3砂粒噴砂-HF/HNO_3混合液雙重酸洗組,每組15片。B組:光滑氧化鋯組,每組15片。C組:粗糙純鈦組,Ti O2砂粒噴砂-HCl/H2SO4混合液雙重酸洗組,每組15片。D組:光滑純鈦組,每組15片。3表面粗糙度檢測采用TR200粗糙度儀檢測各組氧化鋯片、純鈦片表面粗糙度。4掃描電鏡觀察各組試件表面形貌選取的各組氧化鋯片、純鈦片經(jīng)粘結(jié)、噴金后,掃描電鏡觀察各樣本表面形貌。5 X線能譜分析儀對各試件表面進(jìn)行元素分析選取的各組氧化鋯片、純鈦片經(jīng)粘結(jié)后,X線能譜分析儀對各樣本表面進(jìn)行元素檢測。6成骨細(xì)胞復(fù)蘇、傳代取凍存成骨細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇,將培養(yǎng)瓶置于37℃,5%CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)給細(xì)胞傳代。7細(xì)胞接種將經(jīng)高溫高壓消毒備用的A,B兩組氧化鋯片,C,D兩組純鈦片分別放入12孔培養(yǎng)板內(nèi)備用。取復(fù)蘇后第2~3代生長狀態(tài)良好的成骨細(xì)胞,制備成細(xì)胞濃度為1×10~5個(gè)/ml及2×10~5個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液,分別接種于A,B兩組氧化鋯片C,D兩組純鈦片表面。8樣本表面成骨細(xì)胞形態(tài)掃描電鏡觀察分別于成骨細(xì)胞接種1h,6h,24h時(shí),隨機(jī)取出A,B兩組接種成骨細(xì)胞的氧化鋯片和C,D兩組接種成骨細(xì)胞的純鈦片各2枚,掃描電鏡觀察各組樣本表面成骨細(xì)胞形態(tài)。9樣本表面成骨細(xì)胞肌動(dòng)蛋白免疫熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察分別于成骨細(xì)胞接種1h,6h,24h,隨機(jī)取出A,B兩組接種成骨細(xì)胞的氧化鋯片和C,D兩組接種成骨細(xì)胞的純鈦片各2枚,Phalloidin免疫熒光染色觀察各組樣本表面成骨細(xì)胞肌動(dòng)蛋白表達(dá)及分布。10樣本表面成骨細(xì)胞MTT法檢測分別于成骨細(xì)胞接種1h,6h,24h,隨機(jī)取出A,B兩組接種成骨細(xì)胞的氧化鋯片和C,D兩組接種成骨細(xì)胞的純鈦片各6枚,MTT法檢測各組樣本表面成骨細(xì)胞在490nm處的吸光度值。11統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件,各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)的形式表示,采用多個(gè)樣本比較的K-WH檢驗(yàn)分析比較相同時(shí)間點(diǎn)時(shí),A,B,C,D四組表面的吸光度值的組間差異及各時(shí)間點(diǎn)時(shí),A,B,C,D四組表面成骨細(xì)胞的吸光度值的的組內(nèi)差異,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1表面粗糙檢測A 組:0.648±0.229μm;B 組:0.450±0.053μm;C 組:2.142±0.235μm;D 組:0.674±0.152μm。2掃描電鏡A組,100目Al2O_3噴砂-雙重酸洗氧化鋯片:表面形成大小約0.2~10μm左右的窩洞,其中以較為均勻的大小約0.2~0.8μm左右的窩洞為主。B組,光滑氧化鋯片:表面可見淺顯的條紋狀結(jié)構(gòu)。C組,80目Ti O2砂粒噴砂-雙重酸洗純鈦片:表面形成大小約1~5μm的二級窩洞及10~20μm的一級窩洞。D組,光滑純鈦片:表面可見明顯的條紋狀結(jié)構(gòu)。3 X線能譜分析儀對各樣本表面進(jìn)行元素分析A,B兩組氧化鋯表面與C,D兩組純鈦表面均未發(fā)現(xiàn)異種元素殘留。4成骨細(xì)胞粘附的掃描電鏡觀察粗糙氧化鋯及粗糙純鈦表面細(xì)胞生長狀態(tài)較好,細(xì)胞可見較多偽足并且偽足嵌入周圍窩洞內(nèi)。光滑純鈦及光滑氧化鋯表面細(xì)胞多呈平鋪樣伸展,細(xì)胞面積較大,但細(xì)胞偽足較少。5成骨細(xì)胞肌動(dòng)蛋白免疫熒光染色觀察粗糙氧化鋯及粗糙純鈦表面成骨細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白纖維較光滑組多,且粗糙樣本表面成骨細(xì)胞偽足較多,細(xì)胞多呈立體樣,光滑氧化鋯及光滑鈦表面細(xì)胞較扁平,偽足較少。24h時(shí),成骨細(xì)胞均表現(xiàn)出長梭形或多角形,細(xì)胞偽足相互接觸,彼此交聯(lián)成網(wǎng)狀。粗糙純鈦表面細(xì)胞形態(tài)不及粗糙氧化鋯表面細(xì)胞形態(tài)完整。6成骨細(xì)胞在各組樣本表面增殖活性檢測1)各組樣本表面成骨細(xì)胞接種培養(yǎng)1h,6h,24h后的吸光度值分別為:1h,A:0.248±0.019,B:0.238±0.038,C:0.317±0.027,D:0.297±0.040;6h,A:0.531±0.019,B:0.516±0.037,C:0.592±0.053,D:0.489±0.025;24h,A:0.897±0.080,B:0.797±0.029,C:0.909±0.085,D:0.730±0.036。不同時(shí)間點(diǎn)時(shí),各組組內(nèi)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2)各組相同時(shí)間點(diǎn)組間比較:1h時(shí):A組與C組、A組與D組、B組與C組、B組與D組的吸光度值異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組與B組、C組與D組的吸光度值差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6h時(shí),A組與C組、A組與D組、B組與C組、B組與D組、C組與D組的吸光度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組與B組的吸光度值差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。24h時(shí),A組與B組、A組與D組、B組與C組、B組與D組、C組與D組的吸光度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組與C組的的吸光度值差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1通過噴砂-雙酸洗能在氧化鋯及純鈦表面獲得較好的表面形貌。2氧化鋯具有與純鈦類似的生物相容性,通過對表面進(jìn)行處理可以促進(jìn)成骨細(xì)胞早期粘附。3噴砂-雙酸洗氧化鋯及純鈦表面能通過促進(jìn)成骨細(xì)胞肌動(dòng)蛋白的表達(dá)從而促進(jìn)成骨細(xì)胞的早期粘附及增殖。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.1

【參考文獻(xiàn)】

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7 王海，

本文編號：1314984