本文關(guān)鍵詞：Runx2與Osx在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中表達(dá)的研究　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： Runx2 Osx DSPP 牙髓細(xì)胞 修復(fù)性牙本質(zhì)

【摘要】：背景和目的:齲損和外傷是能引起牙髓炎性損傷,并最終導(dǎo)致人類牙列缺損的重要病因。然而當(dāng)牙齒發(fā)生齲損、物理摩擦,外傷等輕微損傷時(shí),髓腔內(nèi)的牙髓細(xì)胞會(huì)發(fā)生遷徙,增殖,并分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞,進(jìn)而礦化成熟,成為反應(yīng)性牙本質(zhì),亦稱修復(fù)性牙本質(zhì)。研究牙髓的損傷后修復(fù)機(jī)制為保存患牙提供了可能。Runx相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)和Osx(Osterix)是骨發(fā)生及骨形成中重要轉(zhuǎn)錄因子,近期研究發(fā)現(xiàn)兩者均參與調(diào)控牙齒的發(fā)生和形成。牙本質(zhì)涎磷蛋白(Dentin sialoph-osphoprotein,DSPP)是成牙本質(zhì)細(xì)胞分化成熟的標(biāo)志性蛋白,研究已證實(shí)其轉(zhuǎn)錄受Runx2調(diào)控。成骨相關(guān)報(bào)道中提示,Osx是Runx2的下游基因,Runx2基因有缺陷時(shí),檢測(cè)不到Osx的表達(dá),Osx激動(dòng)子區(qū)域有Runx2特有的結(jié)合元素,Runx2通過與其相結(jié)合,直接調(diào)控Osx的表達(dá)和功能,但二者在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中是否發(fā)揮功能仍不明了,而在牙齒發(fā)育過程中,Osx可以調(diào)節(jié)DSPP的表達(dá)。因此,本課題建立大鼠牙髓損傷模型,觀察損傷后不同時(shí)期修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中Runx2和Osx基因表達(dá)模式的變化,初步探討Runx2和Osx與修復(fù)性牙本質(zhì)形成之間的關(guān)系。方法:1.建立大鼠牙髓損傷模型。60只體質(zhì)量約為200g的雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組和損傷模型組(n=10)�？鞕C(jī)球鉆在50只損傷模型組大鼠雙側(cè)下頜第一磨牙常規(guī)行開髓術(shù),開髓后不做任何處理,以髓腔暴露時(shí)間0h,3h,12h,3d及7d對(duì)損傷模型組進(jìn)行分組,正常對(duì)照組不做開髓處理。隨后每組隨機(jī)選取4只灌注處死(共24只),取其雙側(cè)下頜第一磨牙及周圍下頜骨標(biāo)本并制成切片,以蘇木精-伊紅(HE)染色法確定牙髓損傷模型的建立。2.觀察Runx2、Osx和DSPP的蛋白和m RNA在大鼠下頜第一磨牙修復(fù)性牙本質(zhì)形成時(shí)表達(dá)模式的變化。通過免疫熒光的方法對(duì)正常對(duì)照組及損傷0h,3h,12h,3d及7d組標(biāo)本制備的切片進(jìn)行染色,共聚焦顯微鏡下觀察Runx2、Osx和DSPP蛋白在各模型組中表達(dá)模式的變化。脫頸處死正常對(duì)照組及損傷0h,3h,12h,3d及7d組大鼠(共36只)并提取雙側(cè)下頜第一磨牙,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(Real-time PCR),對(duì)其總RNA進(jìn)行定量分析,比較Runx2、Osx和DSPP m RNA在各組模型中表達(dá)量的變化。結(jié)果:1.牙髓損傷后成牙本質(zhì)細(xì)胞遷徙變性,損傷下方出現(xiàn)急性炎癥特征,在損傷7d,在損傷下方牙髓腔內(nèi)可見修復(fù)性牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)形成。2.Real-time PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn):Runx2 m RNA表達(dá)量在損傷后12h最高,且顯著高于對(duì)照組(P0.01),損傷后3d,Runx2 m RNA表達(dá)量顯著低于損傷后12h組(P0.01),直至損傷后7d,Runx2 m RNA表達(dá)量持續(xù)降低,明顯低于損傷后12h組及3d組(P0.01),但較之正常對(duì)照組其表達(dá)量有顯著差異。Osx和DSPP m RNA的表達(dá)量在損傷后0h較之對(duì)照組無明顯差異(P0.05),從損傷后3h開始表達(dá)量呈逐漸上升趨勢(shì),且明顯高于對(duì)照組,組間比較均有顯著差異(P0.01);免疫熒光染色發(fā)現(xiàn):Runx2、Osx和DSPP蛋白主要表達(dá)于損傷下方,Runx2表達(dá)呈“拋物線”狀,損傷后3天表達(dá)最為強(qiáng)烈(P0.01),隨后逐漸下降;Osx和DSPP表達(dá)均呈逐漸上調(diào)的趨勢(shì),Osx蛋白表達(dá)在損傷后7天上調(diào)最為明顯(P0.01),而DSPP蛋白則在損傷后3天表達(dá)顯著增強(qiáng)(P0.01)。結(jié)論:1.出生后的大鼠在牙髓組織受到機(jī)械作用時(shí),發(fā)生炎癥反應(yīng),大鼠磨牙牙髓具有形成修復(fù)性牙本質(zhì)的潛能。2.Runx2、Osx和DSPP在牙髓損傷后的不同時(shí)期具有不同的表達(dá)模式,在不同部位表達(dá)模式亦不同。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 胡超;李適廷;張綱;譚穎徽;;NICD過表達(dá)對(duì)人牙髓干細(xì)胞細(xì)胞增殖及細(xì)胞遷移的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2014年04期

2 張馳;;成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Osterix對(duì)骨形成作用的分子機(jī)制(英文)[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

，

本文編號(hào)：1314244