本文關鍵詞：內毒素刺激下不同靜壓力下人牙周膜成纖維細胞對IL-17等促炎因子表達的影響初探

  更多相關文章： 人牙周膜成纖維細胞 白介素17 內毒素 靜壓力

【摘要】：實驗目的：本實驗通過體外培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞(Human periodontal ligament fibroblasts, HPDLF)并以牙齦卟啉單胞菌內毒素(Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharide, Pg.LPS)刺激建立好的HPDLF體外靜壓力模型,檢測IL-17等炎性細胞因子在HPDLF中的表達情況,探討靜壓力及Pg.LPS雙重作用下IL-17A、IL-6及IL-1β在人牙周膜成纖維細胞內的表達變化,研究正畸力及炎癥對人牙周膜成纖維細胞的聯(lián)合作用,為牙周炎環(huán)境下的正畸牙移動及相關性牙根吸收的具體機制提供新思路。實驗方法：1.采用組織塊培養(yǎng)法對來源于健康前磨牙根中1/3的牙周膜進行分離與培養(yǎng)。采用免疫細胞化學(Immunocytochemistry,ICC) SP法對培養(yǎng)的細胞進行來源鑒定,并采用噻唑蘭比色法(MTT)繪制HPDLF生長曲線,建立HPDLF細胞系；2.MTT法檢測濃度1～10μg/ml對HPDLF增殖活性的影響；3.體外用濃度為4μg/ml的內毒素刺激HPDLF,并施以0～5 g/cm2靜壓力模擬正畸加力。采用熒光定量PCR檢測內毒素刺激下HPDLF在0-5g/cm2靜壓力加載24 h后IL-17AmRNA、IL-6mRNA的表達情況。4.采用ELISA檢測內毒素刺激下HPDLF在0～5g/cm2靜壓力加載24 h后IL-17A、IL-6和IL-1β蛋白的表達情況。實驗結果：1.所培養(yǎng)的細胞為長梭形,呈放射狀或漩渦狀生長,生長性狀穩(wěn)定,經(jīng)細胞來源鑒定為中胚層來源細胞,結合取材部位可鑒定為HPDLF。 HPDLF的生長曲線呈“S”形,從接種的第2天開始,細胞進入對數(shù)生長期,細胞增殖速度在第6天變緩進入平臺期。2.1～4μg/mlPg.LPS對HPDLF的增殖有明顯促進作用,其中,4μg/ml濃度組中HPDLF細胞活力最強,5～7μg/ml濃度組中HPDLF細胞活力逐漸下降,8～10μg/ml濃度組細胞活力明顯受到抑制。3.經(jīng)熒光定量PCR檢測,單純靜壓力組及Pg.LPS+靜壓力組中,IL-17A、IL-6的mRNA相對表達量均呈力值相關性,隨著靜壓力值的遞增而表達增強,表達量分別在4g/cm2組和3g/cm2組達最大值,隨后隨力值的增大而表達量減��；在同等力值下,EL-17A、IL-6mRNA在單純靜壓力組中的表達高于Pg.LPS+靜壓力組,其差異具有統(tǒng)計學意義。4.經(jīng)ELISA檢測,單純靜壓力組及Pg.LPS+靜壓力組中,IL-1β、 IL-17A、IL-6的蛋白表達量均呈力值相關性,隨著靜壓力值的遞增而表達增強,其表達量分別在4 g/cm2組和3 g/cm2組達最大值,隨后隨力值的增大而表達量減��；在同等力值下,IL-1β、IL-17A、IL-6蛋白在單純靜壓力組中的表達高于Pg.LPS+靜壓力組,其差異具有統(tǒng)計學意義。實驗結論：1.采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)HPDLF原代細胞,成功地建立了人牙周膜成纖維細胞系,第4～6代細胞,增殖旺盛,生物學性狀穩(wěn)定。2.過高濃度的內毒素會抑制HPDLF增殖,而適宜濃度的內毒素能促進HPDLF增殖,其中4μg/ml為最適濃度。3.內毒素能刺激HPDLF對IL-17A、DL-6及IL-1β等炎性細胞因子的表達,且表達量呈力值相關性,在3 g/cm2靜壓力刺激下表達量最大；但與靜壓力聯(lián)合作用時對IL-17A、IL-6及IL-1β等炎性細胞因子表達促進作用減小。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R783.5

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 廖文琴;陳永安;;靜壓力大小對人牙周膜成纖維細胞Ⅰ型膠原表達影響的研究[J];廣東牙病防治;2011年11期

2 馬軍利,王美青,張e，

本文編號：1306350