本文關鍵詞：遺傳性眶距過寬面部畸形患者的臨床檢查及遺傳學分析

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【摘要】：顱面畸形(Craniofacial Deformity,CD)是一種影響人類頭、面、頸發(fā)育的先天性疾病,占先天性出生缺陷病的四分之三�？艟噙^寬是某些顱面畸形疾病的臨床表現(xiàn),常伴隨其他特殊癥狀出現(xiàn),如突眼、并趾、智力異常等。目前已知多種顱面畸形如顱面裂隙畸形、顱縫早閉癥等均可表現(xiàn)出眶距過寬,雖然染色體的變異或基因突變可引起眶距過寬相關疾病的發(fā)生,但目前其致病機制尚不清楚。在詳細收集家系臨床信息的基礎上,本課題從染色體到基因水平對兩個表現(xiàn)出遺傳性眶距過寬家系進行了系統(tǒng)研究。通過探尋兩個家系相應疾病的致病原因,為同類型疾病的診斷以及臨床干預治療提供理論依據(jù),基因診斷明確后可為患者及其家庭成員進行發(fā)病風險評估甚至指導產(chǎn)前診斷。第一部家系一的臨床檢查及遺傳學研究1材料和方法1.1臨床檢查分別采集家系一患者及正常成員的詳細病史、遺傳學信息,患者進行必要的體格檢查及相關�？茩z查;1.2全血基因組DNA提取抽取家系患者及正常成員的外周血液樣本,提取全血基因組DNA;1.3核型分析對家系一患者進行染色體G顯帶核型分析實驗,觀察染色體結構和數(shù)量的情況;1.4 a CGH檢查采用微陣列比較基因組雜交技術檢測患者是否存在染色體拷貝數(shù)變異(Copy Number Variant,CNV);1.5 CNV驗證對a CGH發(fā)現(xiàn)的CNV設計相應的引物,利用熒光定量PCR進行了家系共分離驗證;針對缺失片段的STS區(qū)域進行雜合性缺失分析(Loss of Heterozygosity,LOH),確定CNV的遺傳方式。2結果家系一先證者主要表現(xiàn)為輕度到中度智力障礙和眶距過寬、高額頭和寬鼻根等特殊面容;患者III-3臨床表現(xiàn)與之相似但無明顯智力發(fā)育障礙。先證者有兩個哥哥,已故,均表現(xiàn)出嚴重的智力障礙和發(fā)育障礙。家系的其他成員身體均健康,智力正常�；颊吆诵头治鼋Y果正常,a CGH檢查發(fā)現(xiàn)患者II-3和III-3各自攜帶3個CNV,結合家系正常成員a CGH結果分析和DGV、ISCA數(shù)據(jù)庫比對,鎖定chr14q32.32q32.33的微重復和chr17p13.3的微缺失為家系的致病CNV。熒光定量PCR和LOH分析間接證明了這兩個CNV的致病性和遺傳途徑。3結論本研究中患者同時攜帶chr14q32.32-q32.3微重復和chr17p13.3微缺失兩種拷貝數(shù)變異并表現(xiàn)出兩種綜合征的臨床特征。上述兩個拷貝數(shù)變異為該家系遺傳性眶距過寬的致病原因,本研究首次發(fā)現(xiàn)患者同時攜帶這兩種CNV并且出現(xiàn)在同一綜合征里。第二部家系二的臨床檢查及遺傳學研究1材料和方法1.1臨床檢查分別采集家系二患者及正常成員的詳細病史、遺傳學信息,患者進行必要的體格檢查及相關專科檢查;1.2全血基因組DNA提取抽取家系患者及家系其他成員的外周血液樣本,提取全血基因組DNA;1.3已知基因篩查利用Sanger測序對候選疾病致病基因的外顯子及其旁翼區(qū)的堿基序列進行基因突變檢測;1.4核型分析對家系所有患者進行染色體G顯帶核型分析實驗,觀察染色體結構和數(shù)量的情況;1.5 aCGH檢查采用微陣列比較基因組雜交技術檢測患者染色體拷貝數(shù)變異情況;1.6二代測序探尋致病基因選取合適的樣本進行全外顯子組測序以及分析測序數(shù)據(jù),根據(jù)家系遺傳特征制定個性化篩選策略并篩選出可能的候選基因,基于GO的候選基因功能進行富集分析。2結果家系二連續(xù)3代均有患者表現(xiàn)出嚴重的眶距過寬的面部異常,遺傳方式呈顯性遺傳。部分患者除了明顯的眶距過寬的表現(xiàn)之外,還有其他特殊癥狀,家系其他成員身體健康。經(jīng)過已知致病基因篩查、染色體核型分析、a CGH檢查未找到相關染色體變異和致病基因突變位點。全外顯子組測序以及相關數(shù)據(jù)分析獲得96個候選基因,GO分析發(fā)現(xiàn)在“肽酶活性”功能和“細胞粘附”功能領域候選基因富集程度較高。3結論家系二患者的致病原因復雜,經(jīng)過已知基因篩查、核型分析和a CGH的檢測未發(fā)現(xiàn)患者存在致病位點或染色體變異,排除家系疾病原因與染色體異�；騊feiffer綜合征、Crouzon綜合征、Apert綜合征和顱額鼻綜合征相關。根據(jù)二代測序以及數(shù)據(jù)分析提示家系二患者疾病的致病基因可能與某些“肽酶活性”和“細胞粘附”功能相關。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R782.2
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本文編號：1167926