本文關鍵詞：載BMP2質粒DNA的殼聚糖溫敏水凝膠對牙周膜成纖維細胞相容性的評價

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【摘要】：目的:本項目擬制備物理交聯(lián)殼聚糖-甘油磷酸溫敏水凝膠(CS/α,β-GP)負載含有骨形態(tài)發(fā)生蛋白2質粒DNA的殼聚糖納米粒CSn(pDNA-BMP2),將其與CS/α,β-GP溫敏水凝膠復合,構建CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合修復體系。研究該體系對人牙周成纖維細胞(HPDLCs)的細胞相容性。方法:一、載BMP2質粒DNA的殼聚糖納米粒(CSn(pDNA-BMP2))的制備及性質檢測:成功構建pDNA-BMP2質粒表達載體;采用離子交聯(lián)法制備載BMP2質粒DNA殼聚糖納米粒CSn(pDNA-BMP2);采用掃描電鏡觀察形態(tài);zeta電位儀測定粒徑、分散度、Zeta電位;應用瓊脂凝膠阻滯法分析CSn載體與pDNA-BMP2的結合能力及電荷性質;運用酶保護法測定CSn載體對pDNA-BMP2的保護作用。二、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP體系的構建及性質檢測:(1)CS/α,β-GP溫敏水凝膠的制備:采用物理交聯(lián)的方法制備CS/α,β-GP溫敏水凝膠;掃描電鏡下觀察其微觀形態(tài);試管倒置法測定其溫敏性。(2)CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP體系的構建:取適量的CSn(pDNA-BMP2)磁力攪拌下分散于CS/α,β-GP溫敏水凝膠溶液中,構建載CSn(pDNA-BMP2)的CS/α,β-GP溫敏水凝膠體系,即CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系;掃描電鏡下觀察其微觀形態(tài);試管倒置法測定其溫敏性。三、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP對HPDLCs細胞相容性的評價:(1)原代培養(yǎng)HPDLCs,并鑒定組織來源。(2)HPDLCs在CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系中三維培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)及增殖情況。(3)將HPDLCs在CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系浸提液中培養(yǎng),CCK8法檢測細胞增殖情況;采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件處理所得數(shù)據(jù)。結果:一、CSn(pDNA-BMP2)的制備及性質檢測結果:(1)空白CSn及CSn(pDNA-BMP2)電鏡下觀察,呈球形,粒徑均一;CSn(pDNA-BMP2)粒徑較空白CSn略大。(2)CSn的平均粒徑為170nm,PDI為0.249,Zeta電位為45.5mv。CSn(pDNA-BMP2)平均粒徑為270.1nm,PDI為0.486,Zeta電位為27.0mv。(3)瓊脂凝膠電泳分析顯示,由于中和了質粒DNA所帶的負電荷,電泳時質粒不出孔,而裸質粒pDNA-BMP2出孔,證明CSn能有效地結合pDNA-BMP2;(4)酶保護實驗顯示,裸質粒pDNA-BMP2及N/P為0.5:1的孔內(nèi)顯示空白無條帶,而CSn(pDNA-BMP2)在N/P為1:1、1.5:1、2:1、2.5:1時,則仍為白色。證明CSn(pDNA-BMP2)在N/P為1:1、1.5:1、2:1、2.5:1時,可以有效保護pDNA-BMP2免受酶的降解。二、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系的構建及性質檢測結果:(1)試管倒置法顯示CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系均可在37℃下3 min內(nèi)由可流動的溶膠狀態(tài)轉變?yōu)椴豢闪鲃拥哪z狀態(tài);(2)掃描電鏡顯示,復合體系為多孔的交聯(lián)網(wǎng)狀結構且CSn(pDNA-BMP2)能均勻分散于水凝膠支架的三維網(wǎng)狀結構中。三、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP對HPDLCs細胞相容性的評價結果:(1)成功原代培養(yǎng)HPDLCs,免疫組織化學結果顯示,培養(yǎng)的細胞HPDLCs波形絲蛋白染色陽性,角蛋白染色陰性,證明細胞來源于外胚層。(2)結晶紫染色顯示,HPDLCs在CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系中形態(tài)良好,48h后開始擴增。(3)CCK8實驗結果顯示,不同濃度的CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP溫敏水凝膠復合體系浸提液在1d和3d時均能促進HPDLCs的增殖,且CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP溫敏水凝膠復合體系浸提液培養(yǎng)的HPDLCs較CS-α,β-GP溫敏水凝膠浸提液培養(yǎng)的的細胞增殖更快。結論:(1)CSn具有良好的形態(tài)、粒徑及電位。(2)CSn能有效結合和保護pDNA-BMP2,CS/CSn(pDNA-BMP2)在N/P為2.5:1時具有最好的形態(tài)、粒徑及電位。(3)CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系具有溫敏性及大孔徑,促進HPDLCs的生長和增殖,具備良好的細胞相容性。
【關鍵詞】：骨形成蛋白-2 殼聚糖 殼聚糖納米粒 殼聚糖溫敏水凝膠 人牙周成纖維細胞
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-11
• 實驗一 負載骨形成蛋白-2 質粒DNA的殼聚糖納米粒制備及性質檢測11-20
• 1.1 材料與設備11-12
• 1.2 實驗方法12-14
• 1.3 結果14-17
• 1.4 討論17-20
• 實驗二 載質粒DNA納米粒的殼聚糖溫敏水凝膠復合體系的構建及性質檢測20-26
• 2.1 材料與設備20-21
• 2.2 實驗方法21-22
• 2.3 結果22-24
• 2.4 討論24-26
• 實驗三 載質粒DNA納米粒的殼聚糖溫敏水凝膠復合體系對牙周膜成纖維細胞相容性的評價26-36
• 3.1 材料與設備26-27
• 3.2 實驗方法27-29
• 3.3 結果29-35
• 3.4 討論35-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-41
• 綜述41-51
• 參考文獻48-51
• 攻讀學位期間的研究成果51-52
• 致謝52-53

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2 張喜善;蔡國棟;李建民;楊明峰;;頸椎不穩(wěn)黃韌帶TGFβ1、BMP2表達的實驗研究[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2007年12期

3 ;[J];;年期

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1 孔祥英;林娜;陳衛(wèi)衡;;不同治則方藥對激素性股骨頭壞死雞股骨頭內(nèi)TGF－β1和BMP2表達的影響[A];中華中醫(yī)藥學會骨傷分會第四屆第三次學術年會暨國家中醫(yī)藥管理局“十一五”重點�？疲▽２。┙ㄔO骨傷協(xié)作組經(jīng)驗交流會論文匯編[C];2008年

2 孫立;田曉濱;張宇坤;郜勇;楊述華;;人BMP2、VEGF165雙基因真核表達質粒的構建及體外表達[A];2006年貴州省醫(yī)學會骨科學分會學術年會論文匯編[C];2006年

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1 潘建俸;載BMP2質粒DNA的殼聚糖溫敏水凝膠對牙周膜成纖維細胞相容性的評價[D];青島大學;2015年

2 陳佳濱;BMP2和EGFP重組腺病毒體外轉染兔骨髓間充質干細胞的研究[D];桂林醫(yī)學院;2014年

3 李勇;大鼠骨髓間充質干細胞生物學特性及BMP2在誘導其向神經(jīng)元樣細胞分化中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2004年

4 王卓;幼齡水貂毛囊發(fā)育及皮膚中β-catenin和BMP2表達規(guī)律的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2014年

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本文編號：1125461