本文關(guān)鍵詞：心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍愈合影響的研究

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【摘要】：科技高速發(fā)展的全方位的滲透,隨之而來是社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)的日益激烈、工作生活狀態(tài)的快節(jié)奏化加之自身狀態(tài)的調(diào)節(jié)不善等,這些都為成為現(xiàn)代人各種生理及心理應(yīng)激的來源。過強(qiáng)持久的應(yīng)激會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不利影響,甚至?xí)䦟?dǎo)致一系列疾病的產(chǎn)生。大量研究表明,心理應(yīng)激與全身系統(tǒng)性疾病的發(fā)生發(fā)展存在相關(guān)關(guān)系�？谇粷兓疾÷示涌谇火つげ≈�,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,病因及致病機(jī)制不明且存在明顯個(gè)體差異,其中異常的免疫反應(yīng)及不良的環(huán)境因素與口腔潰瘍的發(fā)生密切相關(guān)。研究證實(shí)長(zhǎng)期持續(xù)的心理應(yīng)激可以導(dǎo)致機(jī)體的免疫力低下,引起機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。心理應(yīng)激作為一種不良的外界刺激因素,當(dāng)機(jī)體受到應(yīng)激時(shí),交感神經(jīng)興奮、HPA軸激活,抑制細(xì)胞免疫而增強(qiáng)體液免疫,影響機(jī)體免疫系統(tǒng);在創(chuàng)傷修復(fù)中,炎性細(xì)胞因子釋放水平的改變?cè)斐沙衫w維細(xì)胞分化延遲,最終導(dǎo)致皮膚及黏膜創(chuàng)口的愈合時(shí)間延長(zhǎng)。同時(shí),口腔潰瘍的發(fā)生與緊張刺激的心理反應(yīng)密切相關(guān)。綜上所述,心理應(yīng)激可以引發(fā)機(jī)體的異常免疫反應(yīng),同時(shí)作為環(huán)境因素整的不良因素,在口腔潰瘍的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。那么,在口腔潰瘍的愈合過程中,負(fù)性心理因素是否會(huì)影響潰瘍愈合的進(jìn)程,以及其中的分子機(jī)制如何,值得我們?nèi)ヌ骄俊Ｒ虼?本研究基于前期工作基礎(chǔ),選取心理應(yīng)激-免疫-口腔潰瘍這條主線,通過慢性束縛建立大鼠心理應(yīng)激模型及燒灼法建立大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍模型,采用行為學(xué)實(shí)驗(yàn)、elisa技術(shù)、組織病理學(xué)染色、免疫組織化學(xué)染色等方法觀察在應(yīng)激狀態(tài)下口腔潰瘍的發(fā)展、愈合以及愈合影響因子的表達(dá)變化,初步探究心理應(yīng)激對(duì)口腔潰瘍愈合的影響及其分子機(jī)制,為下一步深入研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為臨床與心因性因素相關(guān)的口腔潰瘍的發(fā)生及治療提供指導(dǎo)。本研究分為以下三部分實(shí)驗(yàn):第一部分:大鼠心理應(yīng)激模型及實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍模型的建立與評(píng)價(jià)采用完全隨機(jī)方法將大鼠分為四組:對(duì)照組(control)、潰瘍組(u)、潰瘍+心理應(yīng)激組(u+s)、潰瘍+心理應(yīng)激+抗應(yīng)激藥物組(u+s+m)。每組再按照實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為0h(刺激后即刻)、24h、48h、72h、120h組。采用束縛應(yīng)激的方式建立大鼠慢性心理應(yīng)激模型,潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組和抗應(yīng)激藥物組大鼠每日給予6h束縛應(yīng)激,連續(xù)應(yīng)激7d。7d后,使用尖端直徑為4mm的單電電極灼燒單純潰瘍組、潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組和抗應(yīng)激藥物組大鼠舌背部建立心理應(yīng)激環(huán)境下的口腔潰瘍模型。模型建立成功后,潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組和抗應(yīng)激藥物組按照時(shí)間點(diǎn)要求繼續(xù)給予應(yīng)激,同時(shí)抗應(yīng)激藥物組于每日實(shí)驗(yàn)前半小時(shí)按1mg/kg皮下注射地西泮,于每日實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行大鼠體重測(cè)量,應(yīng)激結(jié)束后進(jìn)行行為學(xué)及血清學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證動(dòng)物應(yīng)激模。結(jié)果顯示:潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組大鼠體重增長(zhǎng)速度明顯減慢、行為學(xué)異常、血清皮質(zhì)酮(corticosterone,cort)與促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropichormone,acth)水平顯著升高。而地西泮能夠減輕動(dòng)物的應(yīng)激樣行為學(xué)、血清學(xué)變化。本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)慢性束縛應(yīng)激能夠使大鼠處于心理應(yīng)激狀態(tài),心理應(yīng)激模型建立有效。電極灼燒后舌體部黏膜出現(xiàn)潰瘍組織面,覆蓋黃色假膜,周邊有充血紅暈帶,中央凹陷,符合口腔潰瘍“紅、黃、凹”的臨床特征。he組織病理顯示炎細(xì)胞大量浸潤(rùn),固有層內(nèi)膠原纖維水腫變性,毛細(xì)血管充血擴(kuò)張,膠原沉積等,表現(xiàn)出典型的口腔潰瘍的組織學(xué)特點(diǎn)。證實(shí)該實(shí)驗(yàn)方法的可靠性。第二部分:心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍自然愈合的影響我們通過大體及組織學(xué)觀察不同時(shí)間點(diǎn)潰瘍組織的愈合情況,探討心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍愈合的影響。結(jié)果顯示,0h時(shí),各實(shí)驗(yàn)組間無顯著性差異。舌體黏膜組織呈現(xiàn)由壞死組織和以中性粒細(xì)胞為主的炎性滲出物覆蓋的潰瘍;黏膜固有層可觀察到中、高強(qiáng)度的充血及水腫;潰瘍基底部觀察到離散、中度的血管再生。24h、48h時(shí),肉芽組織、血管生成和膠原沉積在單純潰瘍組明顯比潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組更加強(qiáng)烈。72h時(shí)進(jìn)入潰瘍修復(fù)期,單純潰瘍組黏膜上皮水腫消失,可見少量新生上皮,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,仍以中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞為主;黏膜固有層中大量新生膠原,排列較整齊,可見新生肉芽組織,血管再生明顯。潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組與單純潰瘍組相比,炎癥細(xì)胞仍大量浸潤(rùn);黏膜上皮固有層內(nèi)膠原纖維排列紊亂,炎癥明顯,血管再生較少�？箲�(yīng)激藥物組與潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組相比,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,固有層可見大量新生膠原,血管再生明顯。以上結(jié)果說明,心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍的自然愈合有負(fù)性影響作用,而地西泮的應(yīng)用能夠在一定程度上逆轉(zhuǎn)這種負(fù)性效應(yīng)。第三部分:心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍影響的分子機(jī)制初探在本部分實(shí)驗(yàn)中,以hsp70以及egf在潰瘍區(qū)域的表達(dá)作為切入點(diǎn),運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)潰瘍部位熱休克蛋白70(hsp70)及表皮生長(zhǎng)因子(egf)的表達(dá)情況。hsp70表達(dá)結(jié)果顯示:在各個(gè)時(shí)間點(diǎn),正常對(duì)照組hsp70均呈陰性或低表達(dá),單純潰瘍組大鼠潰瘍區(qū)域hsp70部分表達(dá)。隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng),各實(shí)驗(yàn)組間hsp70表達(dá)量逐漸增加,潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組hsp70表達(dá)量高于正常對(duì)照組及單純潰瘍組間,且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。72h時(shí),潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組hsp70表達(dá)達(dá)到最高峰,抗應(yīng)激藥物組較心理應(yīng)激組hsp70表達(dá)量有所升高,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。egf表達(dá)結(jié)果顯示:在各時(shí)間點(diǎn),正常對(duì)照組均有陽性表達(dá),而其余各實(shí)驗(yàn)組燒灼產(chǎn)生潰瘍后,egf陽性細(xì)胞數(shù)增加。隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng),各實(shí)驗(yàn)組egf表達(dá)量逐漸增多,其中48h時(shí)egf表達(dá)量增幅最大。除0h以外,各時(shí)間點(diǎn)egf表達(dá)量在潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組均低于單純潰瘍組,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。48h及72h時(shí),egf表達(dá)量在抗應(yīng)激藥物組高于心理應(yīng)激組,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1、慢性束縛應(yīng)激可以使大鼠產(chǎn)生心理應(yīng)激狀態(tài),引起一系列應(yīng)激性改變;灼燒法可以有效建立大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍模型。2、心理應(yīng)激可以減慢潰瘍黏膜愈合過程中炎癥消除、膠原沉積、血管再生等,從而影響口腔黏膜組織的修復(fù)。3、潰瘍愈合期,心理應(yīng)激使得HSP70的表達(dá)升高,提示HSP70在口腔黏膜組織修復(fù)中起到一定作用。4、潰瘍愈合期,心理應(yīng)激使得EGF的表達(dá)量降低,證實(shí)EGF參與了潰瘍的愈合過程,提示這可能是心理應(yīng)激影響潰瘍黏膜組織愈合的機(jī)制之一。5、抗應(yīng)激藥物地西泮能夠有效拮抗心理應(yīng)激帶來的口腔黏膜負(fù)性效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：心理應(yīng)激 電極灼燒 實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍 黏膜愈合 熱休克蛋白70 表皮生長(zhǎng)因子 地西泮
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.5
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-26
• 1 心理應(yīng)激研究進(jìn)展16-20
• 2 口腔潰瘍病因相關(guān)研究現(xiàn)狀20-23
• 3 HSP7023-24
• 4 EGF24-26
• 第一部分 大鼠心理應(yīng)激模型及實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍模型的建立與評(píng)價(jià)26-35
• 1 材料26-27
• 2 方法27-29
• 3 結(jié)果29-32
• 4 討論32-35
• 第二部分 心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍自然愈合的影響35-40
• 1 材料35
• 2 方法35-36
• 3 結(jié)果36-38
• 4 討論38-40
• 第三部分 心理應(yīng)激對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍影響的分子機(jī)制初探40-45
• 1 材料40
• 2 方法40-41
• 3 結(jié)果41-44
• 4 討論44-45
• 小結(jié)45-47
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 附錄55-56
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果56-57
• 致謝57

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本文編號(hào)：1048557