本文關(guān)鍵詞：低能量激光照射對受牽張力刺激的人牙周膜細(xì)胞成骨分化的影響

  更多相關(guān)文章： 弱激光 牙周膜細(xì)胞 周期性張應(yīng)力 牙移動

【摘要】：目的:建立人牙周膜細(xì)胞(human periodontal ligament cells h PDLCs)體外張應(yīng)力加載模型,探討弱激光照射(low level laser irradiation,LLLI)對受張應(yīng)力刺激的h PDLCs成骨分化的影響,為揭示LLLI促進(jìn)正畸牙移動的分子生物學(xué)機制奠定理論基礎(chǔ)。方法:1、取臨床健康青少年(12-16歲)因正畸治療需要拔除的雙尖牙根中1/3牙周膜組織,通過組織塊結(jié)合酶消化法對h PDLCs進(jìn)行原代分離培養(yǎng),常規(guī)的換液、消化、傳代,細(xì)胞呈貼壁生長狀態(tài)。取第三代細(xì)胞用于細(xì)胞來源的鑒定,第四代細(xì)胞用于本實驗中。2、人牙周膜細(xì)胞應(yīng)力及激光加載實驗:取第四代細(xì)胞常規(guī)復(fù)蘇后,分為三組,即A組(空白組)、B組(張應(yīng)力加載組)和C組(弱激光照射并張應(yīng)力加載組),接種于6孔板中。A組細(xì)胞既不加力也不照射;B組細(xì)胞分別給予2h、6h、12h、24h的10%周期性張應(yīng)力刺激;C組細(xì)胞先進(jìn)行2s、5s激光照射,再分別進(jìn)行2h、6h、12h、24h的周期性張應(yīng)力加載。3、提取各組細(xì)胞的總RNA和總蛋白,通過實時熒光定量檢測技術(shù)(q RT-PCR)和免疫印跡(Western Blotting)檢測技術(shù),對各組成骨分化指標(biāo)ALP、Runx2、OCN進(jìn)行基因及蛋白檢測。4、應(yīng)用SPSSl7.0醫(yī)用統(tǒng)計軟件包進(jìn)行方差分析。實驗所得數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示。應(yīng)用方差分析的統(tǒng)計方法,對A組、B組、C組各指標(biāo)的m RNA和蛋白表達(dá)量差異進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析;使用LSD-t檢驗方法進(jìn)行均數(shù)間的兩兩比較,以p0.05視為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1、h PDLCs鑒定:鏡下觀察,細(xì)胞呈長梭形,排列成放射狀或是漩渦狀。細(xì)胞抗波形絲蛋白染色陽性,抗角蛋白染色陰性,說明所得細(xì)胞為間充質(zhì)來源。2、q RT-PCR檢測結(jié)果顯示:不同的加力時間段,不同的激光照射劑量條件下,ALP、Runx2、OCN的m RNA表達(dá)量A組、B組、C組任兩組間比較差異有顯著性(p0.05)。C1、C2組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),隨加力時間延長,激光照射時間增加,m RNA的表達(dá)增強,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。3、Western Blotting檢測結(jié)果顯示:ALP、Runx2、OCN的蛋白表達(dá)量隨加力時間和激光照射時間增加而增加,各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);C1、C2組蛋白表達(dá)量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。A組、B組、C組蛋白表達(dá)量結(jié)果與m RNA表達(dá)趨勢一致。結(jié)論:1、組織塊聯(lián)合酶消化法培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞,操作簡單,培養(yǎng)成功率高,是一種可行的原代培養(yǎng)方法。2、弱激光照射能夠加速并增強受周期性張應(yīng)力刺激的人牙周膜細(xì)胞成骨分化指標(biāo)ALP、Runx2、OCN的m RNA和蛋白表達(dá)。3、在一定劑量范圍內(nèi),隨著能量密度增加,LLLI促進(jìn)受張應(yīng)力刺激的人牙周膜細(xì)胞成骨分化的作用增強。
【關(guān)鍵詞】：弱激光 牙周膜細(xì)胞 周期性張應(yīng)力 牙移動
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.5
【目錄】：

• 摘要2-4
• abstract4-9
• 引言9-11
• 第一章 人牙周膜細(xì)胞周期性張應(yīng)力加載模型的建立11-21
• 1. 主要實驗材料11-12
• 2. 實驗方法12-15
• 2.1 人牙周膜細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定12-14
• 2.2 PDLCs 組織來源鑒定14-15
• 3. 實驗結(jié)果15-19
• 4. 討論19-20
• 5. 結(jié)論20-21
• 第二章 弱激光照射對受周期性張應(yīng)力的人牙周膜細(xì)胞ALP、Runx2、OCN mRNA表達(dá)的影響21-33
• 1. 主要實驗材料21
• 2. 實驗方法21-25
• 2.1 人牙周膜細(xì)胞周期性張應(yīng)力及弱激光加載實驗21-22
• 2.2 總 RNA 提取以及實時熒光定量 PCR（q RT-PCR）檢測 ALP、Runx2、OCN 的 m RNA 表達(dá)22-25
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析25
• 3. 實驗結(jié)果25-31
• 4. 討論31-33
• 第三章 弱激光照射對受周期性張應(yīng)力刺激的人牙周膜細(xì)胞ALP、Runx2、OCN蛋白表達(dá)的影響33-41
• 1. 主要實驗材料33
• 2. 實驗方法33-37
• 2.1 實驗分組33
• 2.2 人牙周膜細(xì)胞周期性張應(yīng)力加載及弱激光照射實驗33-34
• 2.3 收集蛋白樣品，，用免疫印跡（Western Blotting）技術(shù)檢測目標(biāo)蛋白 ALP、OCN、Runx2 的蛋白表達(dá)34-37
• 3. 實驗結(jié)果37-40
• 4. 討論40-41
• 全文總結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述45-55
• 綜述參考文獻(xiàn)51-55
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果55-56
• 英文縮略詞表56-57
• 致謝57-58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1017651