本文關(guān)鍵詞：體外大鼠牙囊細(xì)胞促大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化的初步研究

  更多相關(guān)文章： 牙囊細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞共培養(yǎng) 替代分化

【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)采用充分發(fā)揮細(xì)胞自身作用的共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法,建立rBMSCs與rDFCs共培養(yǎng)系統(tǒng),模擬機(jī)體環(huán)境,探討與rDFCs共培養(yǎng)的rBMSCs增殖與成骨分化效應(yīng),以期優(yōu)化牙周組織工程的種子細(xì)胞,促進(jìn)牙周組織工程的良好發(fā)展。方法：1.分離大鼠下頜骨,顯微鏡下取出牙囊,獲取原代rDFCs培養(yǎng)原代rDFCs,傳代純化及組織學(xué)來源鑒定。2.大鼠后肢股骨和脛骨的分離,全骨髓貼壁法獲取rBMSCs,原代培養(yǎng)rBMSCs,傳代純化及組織學(xué)來源鑒定。3.建立rDFCs和rBMSCs共培養(yǎng)系統(tǒng),24孔板接種6孔rBMSCs,24h后與24孔板嵌套的Transwell小室接種rDFCs,共培養(yǎng)3,5,7,9d,采用CCK8法檢測(cè)各組rBMSCs的細(xì)胞增殖活性。4. rBMSCs接種于6孔板,使用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基24h,達(dá)到細(xì)胞周期同步化,與6孔板嵌套的Transwell小室接種rDFCs,建立rDFCs和rBMSCs共培養(yǎng)系統(tǒng),共培養(yǎng)3,5,7,9d,4度預(yù)冷75%乙醇固定,FCM檢測(cè)處于S期+G2期的各組rBMSCs細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比。5. rBMSCs接種于12孔板,24h后rDFC接種于與12孔板嵌套的Transwell小室,建立rDFCs和rBMSCs共培養(yǎng)系統(tǒng),設(shè)置4個(gè)復(fù)孔,共培養(yǎng)7d,14d后,AKP和BCA試劑盒檢測(cè)OD值,通過相關(guān)計(jì)算公式,得出各組rBMSCs細(xì)胞內(nèi)AKP.活性。6.6孔板接種rBMSCs,24h后與其嵌套的Transwell小室接種rDFCs,建立rDFCs和rBMSCs共培養(yǎng)系統(tǒng),共培養(yǎng)10d,RT-PCR檢測(cè)相關(guān)成骨基因BSP,OCN,COL-I,Runx2的表達(dá)情況。結(jié)果：1.免疫組織化學(xué)鑒定結(jié)果證明細(xì)胞來源于外胚層間充質(zhì),結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和取材部位,證明獲取的細(xì)胞為rDFCs。2.成脂、成骨定向誘導(dǎo)及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞特定抗原表達(dá)結(jié)果結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和取材部位,證明獲取的細(xì)胞為rBMSCs。3.CCK-8和流式細(xì)胞儀檢測(cè)rBMSCs的增殖活性,結(jié)果表明共培養(yǎng)5d和7d處理組的增殖活性明顯強(qiáng)于對(duì)比組,統(tǒng)計(jì)分析有差異。4. rBMSCs細(xì)胞內(nèi)AKP活性檢測(cè),共培養(yǎng)7d和14d后,各組細(xì)胞內(nèi)AKP活性均增強(qiáng),處理組的AKP活性和對(duì)比組相比,統(tǒng)計(jì)分析有差異。5. RT-PCR檢測(cè)rBMSCs相關(guān)成骨基因的表達(dá)情況,共培養(yǎng)10d后,處理組的BSP、OCN、COL-I和Runx2基因的相對(duì)表達(dá)量上調(diào)均高于對(duì)比組,統(tǒng)計(jì)分析有差異。結(jié)論：rBMSCs與rDFCs共培養(yǎng)后,rBMSCs增殖活性增加、細(xì)胞內(nèi)AKP活性增強(qiáng),相關(guān)成骨基因BSP、OCN、COL-I和Runx2表達(dá)明顯上調(diào)；因此,BMSCs在牙周組織工程有著廣闊的發(fā)展前景。
【關(guān)鍵詞】：牙囊細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞共培養(yǎng) 替代分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 兩種實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的組織分離、細(xì)胞原代培養(yǎng)、傳代純化及來源鑒定15-28
• 前言15-16
• 第一節(jié) 大鼠牙囊分離、細(xì)胞原代培養(yǎng)、傳代純化及來源鑒定16-20
• 1 材料與方法16-18
• 1.1 主要儀器與試劑材料16
• 1.2 方法16-18
• 2 結(jié)果18-20
• 2.1 rDFCs生長(zhǎng)狀況18-19
• 2.2 rDFCs組織學(xué)來源鑒定19-20
• 3 小結(jié)20
• 第二節(jié) 分離大鼠股骨和腔骨骨髓、細(xì)胞原代培養(yǎng)、傳代純化及來其源鑒定20-25
• 1 材料與方法20-23
• 1.1 主要儀器與試劑材料20-21
• 1.2 方法21-23
• 2 結(jié)果23-25
• 2.1 rBMSCs生長(zhǎng)狀況23-24
• 2.2 rBMSCs組織學(xué)鑒定24-25
• 3 小結(jié)25
• 討論25-28
• 第二部分 rDFCs體外共培養(yǎng)對(duì)r BMSCs增殖活性的研究28-36
• 前言28
• 第一節(jié) CCK-8檢測(cè)r DFCs對(duì)r BMSCs增殖活性的影響28-31
• 1 材料與方法28-30
• 1.1 主要儀器與試劑材料28-29
• 1.2 方法29-30
• 2 結(jié)果30
• 3 小結(jié)30-31
• 第二節(jié) FCM檢測(cè)rDFCs對(duì)r BMSCs增殖活性的影響31-34
• 1 材料與方法31-32
• 1.1 主要儀器與試劑材料31
• 1.2 方法31-32
• 2 結(jié)果32-33
• 3 小結(jié)33-34
• 討論34-36
• 第三部分 rDFCs體外共培養(yǎng)對(duì)r BMSCs成骨分化的研究36-46
• 前言36-37
• 第一節(jié) 體外共培養(yǎng)rDFCs對(duì)r BMSCs的AKP活性的影響37-40
• 1 材料與方法37-38
• 1.1 主要儀器與試劑材料37
• 1.2 方法37-38
• 2 結(jié)果38-39
• 3 小結(jié)39-40
• 第二節(jié) 與rDFCs體外共培養(yǎng)的r BMSCs成骨基因表達(dá)的研究40-43
• 1 材料與方法40-42
• 1.1 主要儀器與試劑材料40
• 1.2 方法40-42
• 2 結(jié)果42-43
• 2.1 BSP.OCN.COL-1.Runx2基因半定量PCR產(chǎn)物電泳圖42
• 2.2 BSP,OCN,COL-1,Runx2基因的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果42-43
• 3 小結(jié)43
• 討論43-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 文獻(xiàn)綜述53-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60-61
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文61

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